真菌的分离与纯化是微生物学中的重要实验技术，主要目的是从混杂的微生物群体中分离出单一的真菌种类，并使其纯化。
以下是一些常用的真菌分离与纯化方法：
一、基本步骤
1.样品采集：根据实验目的，从适当的来源采集含有真菌的样品，如土壤、植物、食品等。
2.预处理：对样品进行必要的预处理，如洗涤、研磨、过滤等，以去除杂质并富集真菌。
3.培养基准备：选择适合真菌生长的培养基，并根据需要调节pH值、温度等条件。常用的培养基有PDA（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）、察氏培养基等。
二、具体方法
1.倾注平板分离法
将预处理后的样品加入无菌培养基中，混合均匀后倾注于无菌培养皿中。
待培养基凝固后，倒置培养皿，在适宜的温度下培养。
培养后，在培养基内部及表面形成单菌落，即可进行挑取和纯化。
2.涂布平板分离法
将微生物悬液均匀涂布在已凝固的无菌培养基表面。
由于某些热敏感菌和严格好氧菌对培养条件有特殊要求，涂布平板法能提供更好的生长环境。
培养后，在培养基表面形成单菌落，便于观察和挑取。
3.平板划线分离法
使用接种环或接种针将样品在固体培养基表面进行连续划线。
通过多次划线稀释，使微生物细胞数量逐步减少，最终达到单菌落分离的目的。
划线方法多样，如斜线法、曲线法、方格法等，可根据需要选择。
3.组织分离法
适用于从子实体或罹病的植株上分离高等真菌或植物致病菌。
切取小块受病组织，进行表面消毒后移置于培养皿中的琼脂培养基上培养。
真菌菌丝从受病组织周围长出并向外扩展，经观察和镜检确认后挑取纯化。
4.稀释摇管法
对于严格厌氧的真菌或对氧气敏感的微生物，可采用稀释摇管法进行分离。
将盛有无菌琼脂培养基的试管加热熔化后冷却至适宜温度，加入待分离的材料进行梯度稀释。
摇动均匀后冷凝，在琼脂柱表面覆盖灭菌液体石蜡以隔绝空气。
培养后菌落形成在琼脂柱中间，通过特定方法挑取和纯化。
5.单细胞（孢子）分离法
利用显微操作技术从混杂群体中直接分离单个真菌细胞或孢子进行培养。
该方法适用于数量较少的微生物种类或难以通过常规方法分离的微生物。
操作难度较大，多限于高度专业化的科学研究中采用。
三、注意事项
在进行真菌分离与纯化时，应严格遵守无菌操作规范以防止污染。
根据真菌的生长特性和实验目的选择合适的培养基和培养条件。
分离过程中应注意观察菌落形态和生长特征以便及时挑取和纯化。
对于难以分离的真菌种类可尝试多种方法结合使用以提高分离效率。
通过以上方法可以有效地从混杂的微生物群体中分离出单一的真菌种类并使其纯化，为后续的研究和应用提供可靠的材料。
