2024/3/15 15:36:00

增强剂

 

1. 激活剂:激活剂通过改善聚合酶的活性,让整个PCR过程焕发活力。10~100ug/ml BSA(牛血清白蛋白)就能在某些情况下提升聚合酶的稳定性和活性。

 

2. 保护剂:保护剂的作用在于防止模板DNA降解,确保DNA的完整性。如T4基因32蛋白能保护单链DNA不受核酸酶攻击。

 

3. 增效剂:增效剂能够提高引物与模板间的亲和力,从而提升扩增的特异性。1%~10%DMSO(二甲基亚砜)就是一种常用的增效剂,能使PCR反应在较高温度下进行,有助于解决模板二级结构引起的问题。

 

4. 促进剂:促进剂填补反应体系中的空隙,为聚合酶提供适宜的工作环境。例如,5%~20%甘油或1.25%~10%甲酰胺可以在某些困难的扩增中作为促进剂使用。

 

5. 净化剂:净化剂清除可能干扰PCR反应的杂质。例如,某些特殊的蛋白酶抑制剂可以防止样本中的蛋白酶干扰反应。

 

6. 调节剂:调节剂负责微调PCR反应的各项参数,如离子浓度等。Mg^2+浓度的适当调整就能显著影响PCR的特异性和产量。

 

7. 链接剂链接剂加固引物与模板之间的连接。比如,有些特定的寡核苷酸可用作“锁式探针”,与目标序列形成稳固的结构,以辅助扩增。

 

抑制剂

 

SDS:离子去污剂,0.01%即可完全抑制PCR反应,0.005%可显著降低产量

 

苯酚:0.5%即可完全抑制PCR反应,0.2%可显著降低产量

 

乙醇:大于1%的浓度可抑制PCR反应,但在某些体系里又能增加产量

 

异丙醇:抑制作用比乙醇稍强

 

乙酸钠:大于5mM时抑制PCR反应

 

氯化钠:大于25mM时抑制PCR反应(生理盐水无影响)

 

EDTA:0.5mM可使PCR产物减少,1mM完全没有PCR产物

 

血红素(heme)-来源:血液,大于1mg/ml抑制PCR反应

 

氯高铁血红素(hemin):大于0.1ng/μl抑制PCR反应

 

丹宁酸(tannic acids):大于0.1ng/μl抑制PCR反应

 

肝素:大于0.15IU/ml抑制PCR反应

 

尿素-来源:尿,大于20mM时产生抑制

 

腐殖质-来源:土壤,植物材料,自然界水

 

植物多糖-来源:粪便,植物多糖

 

聚苯乙烯,聚丙烯-来源:紫外线照射塑料管

 

胆酸盐-来源:粪便

 

胶原质-来源:组织

 

靛青染料-来源:粗斜纹棉布,牛仔裤

 

蛋白酶-来源:牛奶

 

钙离子-来源:牛奶,骨头

 

铁离子-来源:血液

 

二甲苯胺

 

溴酚兰

 

胆红素(bilirubin)

 

其他抑制剂

 

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