👀WB 蛋白样本煮制时间的那些事儿
大家在进行 WB 实验时，可能会有这样的疑问：蛋白样本到底煮多久合适呢？🤔
通常来说，WB 蛋白样本的煮制时间在 3-5 分钟左右。不过，这只是一个大致的范围哦，具体时间还得根据实际情况来调整。👀
通常6孔板细胞80%以上密度，需200ul，其他按平板面积比类推。
在煮制蛋白样本时，有几点需要注意哦：
1、煮制时间不宜过长，不然可能会导致蛋白变性，影响后续实验结果
2、煮制温度控制在 95-100°C 之间为宜。
3、煮制过程中要记得混匀样本，确保样本受热均匀。
当样品核酸、蛋白浓度过高时，煮样后会发现枪头吸不上来，非常粘、一砣一砣的，很容易堵住枪头。
这时候建议两种处理方法：
1、再煮5min。常规煮样时间3-5min，样品过浓时就煮10min；
2、如果10min煮样后，仍然吸不起来，才适当增加buffer，继续煮；也可以对样品进行超声。煮样时间若过长，蛋白会凝固，此时已失去继续WB的意义，请丢弃（判断标准：出现明显的蛋白沉淀和水分层）。
如果你对煮制时间拿不准，不妨先进行预实验，找到最适合的煮制时间吧！
