细胞培养实战攻略涉及多个方面，包括细胞复苏、细胞传代、细胞冻存以及日常培养管理等。
以下是一份详细的细胞培养实战攻略：
一、细胞复苏
准备工作：
确认水浴锅的水清洁可用，并提前打开至37℃预热。
确认好复苏细胞的液氮罐中具体位置，并做好复苏登记。
预热培养基至37℃。
复苏步骤：
将细胞快速放入37℃水浴锅中迅速溶解，期间不要频繁拿起观察，避免细胞受到损伤。
贴壁细胞需离心（1000 rpm，5 min），悬浮细胞则直接加入预热的培养基中。
离心后去除上清，用预热的培养基重悬细胞，然后加入到培养瓶中，最后放入培养箱中培养。
取小样计数观察，细胞活力在70%以上算正常。
二、细胞传代
贴壁细胞传代
观察细胞状态：显微镜下观察细胞状态和密度，80%汇合率以上需要传代。
消化细胞：
在培养瓶中加入适量的胰酶溶液（需37℃预热），使瓶底细胞都浸入溶液中。
放入37℃培养箱进行消化，消化时间根据细胞类型而定，初次培养可设定较短时间，并适时观察。
消化结束后，加入含有血清的培养基终止消化。
吹打与传代：
用移液器轻轻吹打细胞，将细胞全部吹下后，可进行传代，一般是1:3传代。
将细胞悬液均匀地分配到新的培养器皿中，补充新的培养基，轻轻摇匀。
悬浮细胞传代：
取出细胞：将装有细胞的摇瓶从培养箱拿出，用酒精喷洒瓶身后将摇瓶拿进超净台。
计数与传代：
取适量细胞进行计数。
根据细胞数决定下游实验，并计算所需的培养基体积。
将细胞和培养基混合均匀后，分配到新的摇瓶中，放回培养箱培养。
三、细胞冻存
贴壁细胞冻存
准备工作：
将胰酶、培养基提前37℃预热；冻存液提前配好放到4℃冰箱预冷。
消化细胞：同贴壁细胞传代中的消化步骤。
离心与重悬：
将消化后的细胞收集到离心管中，离心（1000 rpm，5 min）。
弃掉上清，加入预冷的冻存液，吹打混匀。
冻存：将混匀的细胞加入冻存管中，放入冻存盒中，最后放入-80℃冰箱。第二天将细胞转移至液氮保存。
悬浮细胞冻存
准备工作：同贴壁细胞冻存中的准备工作。
离心与重悬：将装有细胞的摇瓶中的细胞收集到离心管中，离心（1000 rpm，5 min）。
弃掉上清，加入预冷的冻存液，吹打混匀。
冻存：同贴壁细胞冻存的冻存步骤。
四、日常培养管理
检查培养液：定期检查培养液的颜色与透明度变化，及时更换新鲜培养基。
观察细胞生长：观察细胞生长状态和形态变化，及时传代以避免细胞过密。
预防污染：加强无菌操作观念，预防微生物污染。一旦发现污染，应及时处理。
五、注意事项
细胞系验证：在实验前验证细胞株的正身，避免交叉污染对实验结果的影响。
培养基选择：根据细胞类型选择合适的培养基和血清，确保细胞生长所需的营养条件。
操作规范：严格遵守细胞培养的操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
以上是一份详细的细胞培养实战攻略，希望对您的实验工作有所帮助。
