在细胞生物学研究中，CCK-8 检测实验是一种广泛应用的方法，用于评估细胞增殖、细胞毒性以及药物敏感性等。下面就让我们深入了解这个强大的实验技术，看完这篇文章，你一定会掌握 CCK-8 检测实验的关键要点。

 

一、CCK-8 检测原理

 

CCK-8 全称为 Cell Counting Kit-8，即细胞计数试剂盒 8。其原理是利用水溶性四唑盐 WST-8（2-(2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基)-3-(4 - 硝基苯基)-5-(2,4 - 二磺酸苯)-2H - 四唑单钠盐）在电子耦合试剂存在的情况下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲臜产物（Formazan）。生成的甲臜量与活细胞数量成正比，通过测定吸光度值即可间接反映细胞的数量。

 

二、实验材料准备

 

CCK-8 试剂盒：包括 CCK-8 溶液、说明书等。

细胞：处于对数生长期的细胞，可根据实验目的选择不同类型的细胞系或原代细胞。

培养板：如 96 孔板，根据实验需求确定所需数量。

培养基：适合细胞生长的培养基。

移液器、吸头、离心机等常规实验器材。

 

三、实验步骤

 

细胞接种

将细胞消化、离心后，用培养基重悬，调整细胞浓度至合适范围。

在 96 孔板中接种细胞，每孔加入适量体积的细胞悬液，使细胞均匀分布。一般细胞密度可根据实验目的和细胞类型进行调整，通常为每孔 5000-10000 个细胞。

将接种好细胞的 96 孔板放入培养箱中培养，让细胞贴壁生长。

 

加药处理（可选）

如果要研究药物对细胞的影响，可以在细胞贴壁后加入不同浓度的药物。设置对照组（不加药物）和实验组（加不同浓度药物），每个浓度设置多个复孔以提高实验的准确性。

 

CCK-8 检测

在培养一定时间后（根据细胞生长速度和实验目的确定检测时间，一般为 24-72 小时），每孔加入 CCK-8 溶液。CCK-8 溶液的加入体积通常为培养基体积的 1/10。

将 96 孔板继续放入培养箱中孵育一定时间，一般为 1-4 小时。孵育时间的长短会影响甲臜产物的生成量，可根据实验经验进行调整。

 

测定吸光度

使用酶标仪在特定波长（一般为 450nm）下测定各孔的吸光度值。

 

四、结果分析

 

细胞增殖分析

通过比较不同时间点或不同处理组的吸光度值，可以评估细胞的增殖情况。吸光度值越高，表明细胞数量越多，增殖能力越强。

绘制细胞生长曲线，直观地展示细胞在不同时间点的增殖趋势。

 

细胞毒性分析

实验组与对照组吸光度值的差异可以反映药物或其他处理因素对细胞的毒性作用。吸光度值下降幅度越大，说明细胞毒性越强。

计算细胞存活率，公式为：实验组吸光度值 / 对照组吸光度值 ×100%。

 

药物敏感性分析

通过测定不同药物浓度下的吸光度值，可以确定药物的半数抑制浓度（IC50），即抑制细胞生长 50% 所需的药物浓度。IC50 值越小，说明药物对细胞的抑制作用越强，细胞对该药物越敏感。

 

五、注意事项

 

CCK-8 溶液应现配现用，避免长时间放置导致活性降低。

细胞接种密度要适中，过高或过低都会影响实验结果。

加药处理时，要确保药物的均匀分布，避免局部浓度过高或过低。

孵育时间应根据实验条件进行优化，过长或过短都可能导致不准确的结果。

测定吸光度时，应确保酶标仪的准确性和稳定性，并设置空白对照以消除背景干扰。

 

总之，CCK-8 检测实验是一种简单、快速、准确的细胞生物学实验方法。通过掌握其原理、实验步骤和注意事项，你可以轻松地运用 CCK-8 检测实验来研究细胞增殖、细胞毒性和药物敏感性等问题，为你的科研工作提供有力的支持。