2024/9/14 10:00:00

高速细胞分选的重要性: 自20世纪70年代初以来,细胞分选技术已经存在,但直到21世纪初,高速细胞分选才变得重要。过去,由于速度慢,老式细胞分选仪很难分离足够的细胞进行生化分析。细胞分选主要用于克隆少量活细胞、确认流式细胞术分析确定的细胞类型,或检查其他细胞分离方法分离的细胞纯度。现在,分选出来的目的细胞可进行更多诸如分子生物学、代谢组学等多种技术组合研究,获得样本更全面信息,流式高速多参数分选功能越发重要。


 

细胞分选的一些重要方面:

流体学:在所有细胞分选中都至关重要,特别是在使用带电液滴进行电荷式细胞分选的仪器中。

系统死时间:细胞分选仪处理每个细胞所需的最短时间,这限制了仪器每秒可以处理的细胞数量。

 

死时间对细胞分选速度的影响: 死时间是细胞分选仪在处理一个细胞时无法处理下一个细胞的时间。为了隔离少数(可能非常稀有的)细胞亚群,需要高速细胞分选。多队列系统可以通过在前一个细胞仍在处理时为下一个细胞提供新的信号处理电子设备来减少这种死时间。

 

高速分选的稳定性: 在高速分选实验中,维持长时间的分选稳定性,保持恒定和稳定的液滴断裂位置是好分选结果的前提保障,但对系统设计和性能有着较高的要求。

 

使用高速分选的富集策略: “垂直分选”(straight-ahead)分选(含有感兴趣细胞的液滴不被充电直接进入收集容器,而含有不感兴趣细胞的液滴则被充电并偏转),特别适用于提高稀有细胞亚群的富集效率,减少了因偏转造成的细胞损失。尽可能富集稀有细胞亚群,纯度可能不会太高,可再进行一轮纯度模式分选以提高纯度。

 

如何计算分选纯度: 使用排队理论预测的泊松到达统计来计算分选单位中细胞的到达概率。这涉及到一个简单的“递归关系”,大大简化了计算过程。后面有文举例如何通过理论计算得到大致的纯度结果,敬请持续关注。

 

排冲突事件对分选产量的影响:冲突事件设置(通常拒绝所有包含多于一个细胞的分选单元)会在更高的分选速度下急剧降低分选细胞的产量,通过控制合适的进样速度(如震荡频率的1/5)和宽松点的设置来降低对回收率的影响。

 

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