一、THP-1细胞的培养方法
1、细胞复苏
准备工作：15/50mL的离心管，马克笔，培养瓶（T25）/培养皿（直径60mm），RPMI 1640培养基，胎牛血清（FBS），双抗（PS），酒精瓶（消毒杀菌）+酒精棉球，离心管/试剂管架子，移液枪，tip头（1000/200ul）。
（1）首先用酒精棉球擦拭细胞房的实验台子，将我们所需要上述物品放入台子里，并用紫外照30min，此时打开水浴锅42℃。
（2）照完紫外后，将保存在-80℃或者液氮中的细胞拿出用一次手套包住并迅速放入42℃水浴锅中，一般在1min中内完全解冻。
（3）通过传递箱将细胞拿进细胞房，打开照明，打开细胞台子的玻璃门，用酒精喷洒手和细胞冻存管将细胞拿进台子里，进行细胞复苏。
（4）配置培养基：以50ml离心管为例：RPMI 1640培养基+10% 胎牛血清+ 1%双抗：500ul双抗（PS）+5mL(10%)/7.5(15%)胎牛血清（FBS）+RPMI 1640培养基加至50mL，并做好标记（培养基成分+配置时间+个人标记（名字））。
（5）首先准备一只15ml离心管，将细胞冻存管内的细胞以及冻存液吸取至离心管中，加入2mL 步骤（4）中配置好的RPMI 1640培养基，700~800rpm ，低速离心5min。
（6）离心的时间，准备T25培养瓶或者直径60mm的培养皿做好标记（细胞名称+复苏时间+姓名）。离心完成后，弃上清，吸取1ml新鲜完全培养基重悬细胞。
（7）吸取2-3ml新鲜培养基至准备好培养瓶或者培养皿中，再将1ml细胞重悬液吸取至T25瓶或培养皿，“十字”摇匀细胞。
（8）用酒精喷洒后，将细胞放入37℃，5%CO2培养箱中培养2-3天观察细胞状态。
注意：细胞在偏酸性环境中生长更快，当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，比较适合细胞生长。
2、细胞传代
THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性，一般超过10^6/ml传代，比例一般为1:3/1:4，因此目前利用的两种传代方式：
(1)半换液传代（不用离心）:吸取培养瓶或者培养皿中的细胞移至新的培养瓶或者培养皿中，补足培养基2-3ml。
(2)传统的离心传代：将瓶子或皿中的细胞吸取至15mL离心管中，700-800rpm，离心5min；弃上清，吸取2-3ml新鲜培养基重悬细胞，分至新的培养瓶或者培养皿中并补足培养基2-3ml。
3、细胞冻存
（1）用10%DMSO：900ul FBS + 100ul DMSO （有毒小心操作）或直接用无血清细胞冻存液。
（2）收集生长状态较好的细胞于15 mL离心管中，一般细胞数目为5×10^6-10^7/ml，700-800 rpm离心5 min，在超净工作台中用枪头尽量去掉上清。
（3）加入1 mL冻存液，轻轻吹匀。将细胞放入梯度降温盒中，放入-80℃培养箱中几天后，转移至液氮中进行长期保存。
二、注意事项或培养方面的经验心得
（1）THP-1细胞冻存后复苏困难，因此要保证冻存的细胞数目足够5×10^5-10^6个cell/ml；否则细胞密度过低，复苏后状态不好。
（2）培养过程中如果存在细胞碎片，可等待细胞长起来后，通过低速离心去除。
（3）细胞发生少量聚团时我们可以等待THP-1细胞密度扩大后改善这种情况，但发生严重聚团时我们可以提高血清（FBS）用量，或者适度吹散细胞。
（4）THP-1细胞在传代后可能会出现贴壁现象，如轻微贴壁可以轻 吹收集细胞或者丢弃贴壁的细胞，贴壁较多时，可检查培养条件是否合适。
三、THP-1细胞培养过程中复苏困难、聚团问题分析
1、复苏困难
THP-1细胞对细胞密度具有高度依赖性。冻存时，密度一般为5×10^6-10^7/ml较为适宜；同时复苏密度也有依赖性，建议不低于3×10^6/ml。当细胞传过几次代，状态较好时，传代密度维持在5×10^/ml-10^6/ml较为合适，超过2×10^6/ml可进行传代。培养过程中如有细胞碎片，等细胞密度增大后可以通过低速离心去除。
2、细胞聚团严重
细胞聚团可能是细胞营养缺失或者受到损伤，所以共用了细胞膜，以便于彼此释放的促进生长的因子可以被很快接收到，细胞生长一段时间后，可吹打开，离心，然后换液。另外，THP1细胞离心速度一般不要高于800rpm，实验室常用600-700rpm，否则可能会导致细胞死亡。
（1）THP-1细胞在密度较稀时，有少量细胞聚团属于正常现象，我们需使用面积小的培养瓶（T25瓶）或者培养皿（直径60mm），培养基用量也相应减少，不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，细胞会自然分散开。
（2）当细胞密度高时，聚团细胞比例高于30%时，聚团严重。细胞间界线不清晰，细胞团模糊且较大等现象，则这种细胞聚团是异常的。此时，若对细胞没有做过任何外界刺激或实验处理，可检查培养条件，一般更换优质血清或提高血清用量看是否有助于解决聚团问题。
