2024/12/19 9:17:00

人类随着年龄的增长身体也在不断的变化,还有每时每刻脱落的皮肤、毛发等,那么为什么人体还能维持健康?秘密就在于人体自出生以前就为自己储存了一套自我修复的强力武器——干细胞。

 

那么什么是干细胞?

干细胞是一类具有无限增值或者永生的自我更新能力的细胞,能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞。也因此干细胞具有治疗多种难治型的病症,对于医学具有极其重要的研究和应用价值。

 

干细胞的来源?

干细胞的来源极其广泛,目前以脐带/胎盘、脂肪组织、牙齿组织来源的干细胞应用最为成熟和广泛。三者也各具优势,首先脐带/胎盘等围产期组织属于新生组织,产出的干细胞更为原始,具有较低的免疫源性,应用过程不易产生免疫反应;其次是脂肪组织来源的干细胞因为脂肪组织遍布人体具备易于提取且过程对人体伤害较小,分离培养简单且纯度高;同时牙髓来源的干细胞具备较强成骨分化的能力,分离后易于培养。

 

常见问题?

培养干细胞的过程中许多小伙伴会遇到各种各样的问题和困境,接下来为大家收集整理了常见的几种在干细胞培养过程中常遇到的问题:

 

 分离 

以脐带干细胞分离为例,常会出现单脐带分离过程细胞爬出的时间较长且产出的细胞数量较少,同时也伴有少量杂细胞存在。

想要解决这些问题就需要在源头控制试验方案,首先是脐带的处理过程要尽量完整的剥离脐带中蕴含的血管避免后续分离中出现杂细胞,其次脐带处理过程尽量将脐带裁剪为1-2mm的方形小块,在有条件的情况下可以适当对组织块进行消化后在贴板培养。

 

传代

有部分小伙伴在细胞传代过程会出现子代细胞贴壁效果不佳、细胞形态异常等情况,并且影响后续的实验操作甚至无法进行。

产生这样的原因主要是因为在细胞传代过程消化过度引起,为避免产生这样不利的影响可以严格控制消化时间尽量不要超过两分钟,同时每间隔30s取出观察消化情况并拍打培养瓶帮助细胞脱落。

若实验室细胞种子有富余的情况建议重新制备,若无富余仍想试图挽救一下可以通过将现有细胞消化离心收集,提高接种密度同时适当调高血清密度,待细胞恢复后可继续进行试验,若细胞形态偏瘦不饱满也可以尝试提高血清密度进行挽救,同时血清在使用或者分装前需要混合均匀。

 

 冻存 

实验室常规冻存细胞过程也是大家必备的实验技能之一,但是很多情况下会出现冻存复苏出来的细胞状态不佳、贴壁性能减弱的情况。

首先我们需要根据实际情况对细胞状态进行评估,冻存时调整好冻存的细胞密度,这是我们冻存实验的关键性因素;

其次,DMSO的添加量以及添加顺序也可以对细胞产生不可逆的影响,

实验室常规操作有两种,

第一是先配制冻存体系把所有组分直接混合均匀后再与细胞重悬;

第二种是先将除DMSO除外的组分混合均匀后重悬细胞,再逐渐添加DMSO,最后混合均匀进行冻存;

这样操作的目的都是为了降低DMSO与其他试剂混合过程的产热引起细胞的损伤;

第三冻存液重悬细胞后要控制好转移分装的时间,不宜太长或过短,过长会因为DMSO毒性损伤细胞,时间过短DMSO无法转入细胞起到保护细胞的作用。

 

 

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