样本裂解是生物学实验中一个重要的步骤，它涉及到从细胞或组织中提取蛋白质、RNA或其他生物分子。在进行样本裂解时，需要注意以下几个方面：
一、样本处理
1.保持低温：为了防止蛋白质降解和RNA酶活性的增加，样本在裂解过程中应始终保持在低温条件下，如冰上或4℃环境中。
2.防止污染：使用无菌技术处理样本，避免交叉污染。所有与样本接触的器具，如枪头、EP管、PCR管、离心管等，都应进行去RNA酶化处理，并用75%酒精擦拭实验台面。
3.快速处理：样本从取出到裂解的过程应尽量快速，以减少因样本长时间暴露而导致的降解或污染风险。
二、裂解液的选择和使用
1.选择合适的裂解液：裂解液的选择应根据实验目的和样本类型来确定。例如，对于Western Blot实验，需要选择能够释放蛋白质的裂解液；对于RNA提取，则需要选择能够保持RNA完整性的裂解液。
2.添加酶抑制剂：为了防止蛋白质在裂解过程中的降解，可以在裂解缓冲液中加入合适的蛋白酶抑制剂。如果目的蛋白涉及到磷酸化蛋白，还需要加入磷酸酶抑制剂。
3.控制裂解时间：裂解时间的长短会影响蛋白质的释放和完整性。过长的裂解时间可能导致蛋白质的降解或变性。因此，应根据实验指南或经验确定适当的裂解时间。
三、操作细节
1.充分裂解：确保样本与裂解液充分接触并混合均匀，以实现完全裂解。对于组织样本，可能需要使用玻璃匀浆器或超声破碎等方法来辅助裂解。
2.避免反复冻融：样本在裂解后应尽快分装并保存在液氮或-80℃冰箱中，避免反复冻融以减少蛋白质的降解和RNA的降解风险。
3.记录实验条件：详细记录样本裂解过程中的所有条件，如裂解液成分、裂解时间、温度等，以便后续实验的复现和数据分析。
四、特殊注意事项
1.对于含有高血液含量的组织样本：应多清洗几次尽量把血液去除干净，或用组织红细胞裂解液处理后再进行后续操作，因为血液会影响蛋白浓度测定，以及血液中可能存在的IgG会干扰后续的抗体反应。
2.对于易破碎软组织：如肝脏、脑等，可以剪碎之后加入适量的裂解液，利用玻璃匀浆器进行充分研磨后冰上裂解一段时间（如10~30分钟）。
3.对于硬度大或韧性强组织：如骨组织、皮肤组织等，以及易降解样品（如消化系统相关组织），可以先液氮研磨成细粉，再加入适量裂解液进行裂解。
综上所述，样本裂解是一个复杂而关键的过程，需要注意多个方面的细节以确保实验的成功和数据的准确性。
