一、MTT法测细胞活力的原理
MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）是一种广泛应用于细胞活力和增殖研究的荧光染料。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。通过测定MTT结晶形成的量，可以间接评估细胞的活力和增殖情况。
二、MTT法测细胞活力的操作步骤
1、细胞处理：将细胞消化并收集，制成细胞悬液，调整细胞浓度至适当的细胞数（如5-10×10^4/ml）。
2、细胞接种：将细胞悬液均匀分配至含有MTT的96孔板中，每孔加入适量的细胞悬液。
3、细胞培养：将96孔板放入培养箱中，使细胞达到一定的密度。
4、加药：在细胞贴壁后加入不同浓度的药物，并继续培养。
5、MTT添加：每孔加入一定体积的MTT溶液，通常为每孔10%体积的MTT溶液。
6、孵育：将细胞板放回培养箱中继续孵育3-4小时。
7、溶解MTT产物：孵育后，弃去培养基，加入与初始体积等量的Formazan溶剂，如DMSO，使MTT产物溶解。
8、测定吸光度：使用分光光度计测量吸光度，通常在490nm波长处测定。吸光度值越大，表明活细胞的数量越多，细胞活性越强，药物毒性越小。相反，吸光度值越小，表明活细胞的数量越少，细胞活性越弱，药物毒性越大。
三、MTT法测细胞活力的注意事项
1.选择适当的细胞接种浓度，以确保MTT结晶形成的量与细胞数成线性关系。
2.避免血清干扰，通常选择含有10%以下胎牛血清的培养液进行试验。
3.设立空白对照孔，以便在比色时进行校正。
4.MTT实验吸光度应在0-0.7之间，超出这个范围可能不是直线关系。
5.MTT粉末和溶液保存时需要避光，以保持其稳定性。
四、MTT法的局限性
MTT结晶是非水溶性的，需要使用有机溶剂如DMSO进行溶解，这增加了工作量，并且有机溶剂对人体有毒性。
此外，MTT结晶的颜色深浅不易标准化，有时需要进行预实验来确定最佳的MTT浓度和孵育时间。
因此，MTT法逐渐被更加简便和安全的CCK8法所取代。
