一、细胞不贴壁的常见原因
包括但不限于以下几点：
①胰蛋白酶消化过度：胰酶处理时间过长，可能导致细胞膜蛋白受损，影响细胞贴壁。
②微生物污染：支原体感染或其他微生物污染会导致细胞功能紊乱，影响贴壁能力。
③培养基pH值过碱：培养基pH值过高，可能导致细胞不适应，影响贴壁。
④细胞老化：细胞传代次数过多，可能会导致细胞老化，失去贴附性。
⑤接种细胞起始浓度不当：细胞接种量过低或过高，可能无法形成有效的细胞外基质，影响贴壁。
二、解决细胞不贴壁的方法
①调整消化时间：缩短胰蛋白酶消化时间或降低其浓度，以减少细胞膜蛋白受损。
②检测支原体：分离培养物，检测支原体。如果发现支原体污染，应丢弃培养物。
③调整pH值：使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2，以维持适宜的pH环境。
④细胞复苏和传代：复苏新的细胞，使用20%血清帮助细胞复原，并注意传代接种的细胞密度和时机。
⑤使用合适的培养基：改变培养液成分，使用含有促贴壁因子的培养基。
三、关于如何判断细胞是否受到污染的一些小技巧：
1、看培养基的浊度和颜色变化：细菌和真菌污染通常会导致培养基迅速变浑浊，颜色也会发生变化。
2、镜下观察：用细胞间配置的显微镜可以观察到细菌和真菌的结构，有助于早期发现微生物污染。
3、培养基中的异味：某些微生物污染会产生易察觉的特殊气味，这可以帮助检测污染。
四、注意事项：
1.在细胞培养过程中，应严格遵守无菌操作技术，避免细胞受到污染。
2.使用新鲜且质量合格的培养基和细胞株，以减少污染风险。
3.定期检查细胞状态，如必要，应及时进行传代或处理异常细胞。
