在细胞复苏过程中,正确处理冷冻保护剂是非常关键的步骤,以确保细胞的活性和减少潜在的损伤。
那么在实际操作中我们应该如何正确处理细胞复苏过程中的冷冻保护剂才能将冷冻保护剂对细胞的损伤降到最低呢?
1、快速解冻:首先,将含有冷冻保护剂的冻存管直接浸入37℃至40℃的温水中,并不断摇动以加速溶融过程。这一步骤是为了确保细胞外的结晶在短时间内迅速融化,避免形成胞内再结晶,从而保护细胞免受损伤。
2、去除冷冻保护剂:冻存液一旦完全融化,应尽快通过低速离心去除含有冷冻保护剂的上清液。这是因为冷冻保护剂(如二甲基亚砜DMSO)在室温下对细胞具有毒性,快速去除可以减少对细胞的潜在伤害。
3、细胞重悬:离心后,用含有血清的培养液轻轻重悬细胞,以减少机械应力对细胞的影响。然后计数并重新调整细胞密度,以便接种到培养容器中继续培养。
4、培养:将重悬的细胞转移到培养瓶中,并补足培养液。在适宜的温度和气体条件下静置培养,通常第二天更换一次培养液以去除残留的冷冻保护剂和代谢产物,之后继续常规培养。
注意:
在整个复苏过程中,操作应迅速且小心,以最大程度地恢复细胞的健康状态。
同时,操作人员应采取适当的防护措施,以防止冻伤或接触有害化学物质。