使用流式细胞术测量自然杀伤细胞毒性，该方法具有不使用放射性试剂、高灵敏度和快速检测等优点，并通过对健康个体和预期NK细胞功能缺陷患者的样本进行验证，证明了其在临床环境中的有效性和适用性。
一、实验材料：
1.人外周血单核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMC）：通过分层法从肝素抗凝血液提取。
2.K562细胞系：一种非粘附性和圆形的髓性白血病细胞系，用作NK细胞毒性试验的靶细胞。
3.Vybrant DiO Cell-Labeling Solution(ThermoFisher Scientific, #V22886)：用于标记K562靶细胞。
4.7AAD染料：用于标记死亡细胞。
5.EDTA和肝素：用于血液样本的收集和处理。
二、具体流程：
1.样本选择：使用来自健康成年人和志愿者的血液样本，以及预期NK细胞功能有缺陷的患者（如由Epstein-Barr病毒引起的继发性血嗜性淋巴组织细胞增生症（Hemophagocytic Lymphohistiocytosis, HLH））样本。
2.标本要求：需要3 mL的EDTA血液用于通过FCM计数NK细胞数量，以及10 mL肝素化血液。
3.靶细胞标记：使用DiO染料标记K562细胞，调整细胞浓度至1 × 10^5 cells/mL。
4.效应细胞（PBMC）准备：通过分层法提取PBMC，并使用流式细胞术确定NK细胞百分比，用于调整PBMC的体积。
5.效应/靶细胞孵育：调整PBMC与标记的靶细胞混合比(16:1、8:1、4:1和2:1)，孵育4小时。
6.死亡细胞标记：孵育后使用7AAD对死亡细胞进行标记。
7.流式细胞术分析：分析DiO+靶细胞和7AAD活/死细胞比例。
三、结果分析：
1.FCM方法显示出与51Cr传统方法相比更高的分析灵敏度，并且具有更好的诊断敏感性。
2.效应/靶细胞比16:1、8:1、4:1和2:1可达实验目的。
3.4小时共孵育时间是合适的。
四、讨论：
1.NK细胞是先天免疫的重要组成部分，对免疫监视至关重要。
2.流式细胞术提供了一种替代51Cr释放试验的方法，具有提高实验室安全性、降低长期运行和试剂成本等优点。
3.FCM方法在检测NK细胞毒性方面的可靠性和诊断敏感性得到了验证。
