吐温20作为一种非离子型表面活性剂,在WB实验中主要用于洗掉非特异性结合的蛋白质,从而提高检测的特异性和信噪比。
二、具体作用机制
降低溶液表面张力:吐温20能够降低溶液的表面张力,使抗体更容易扩散并结合到膜上的目标蛋白。
减少非特异性结合:由于吐温20的表面活性剂特性,它可以减少抗体对抗原的非特异性作用,从而洗脱未结合的抗体,降低背景信号。
提供保护作用:在WB洗液中,吐温20与BSA(牛血清白蛋白)类似,对抗原抗体蛋白提供保护作用,确保它们在实验过程中的稳定性和活性。
三、应用实例
在WB实验中,Tween-20常被添加到TBST(Tris Buffered Saline with Tween-20)洗液中。TBST洗液在封闭、一抗二抗孵育等关键步骤中广泛使用。通过调整Tween-20的浓度(如0.05%或0.5ml/L),可以优化实验条件,减少非特异性结合,提高检测结果的准确性。
四、注意事项
浓度选择:Tween-20的浓度应根据实验需求进行调整,过高的浓度可能会影响抗体的结合效率,而过低的浓度则可能无法有效减少非特异性结合。
兼容性:在使用Tween-20时,应注意其与其他实验试剂的兼容性,避免产生不必要的化学反应或影响实验结果。
安全性:虽然Tween-20在实验中广泛使用且被认为是相对安全的,但在操作过程中仍应遵守实验室安全规范,避免直接接触皮肤和眼睛。
综上所述,吐温20在WB实验中发挥着至关重要的作用,通过其独特的表面活性剂特性,有效提高了实验的特异性和信噪比。