流式细胞仪(Flow Cytometer)
1.描述:高速自动化荧光显微镜,核心荧光染色和光学组成与普通显微镜相同,但样品以流动状态通过检测区域。
2.原理:通过荧光标记的单克隆抗体与细胞表面或内部抗原结合,利用流式细胞仪检测信号,了解细胞内外抗原表达情况。
3.应用:除了抗体标记,还可以使用荧光染料染色捕获核酸、钙流、膜电位等信息,以及利用微球技术进行多可溶性蛋白的检测。
4.分选功能:流式分选仪能够对特定细胞亚群进行分选操作。
流式细胞术(Flow Cytometry)
特点:
1.单细胞水平分析。
2.高速分析与分选,可达十万级别。
3.大量细胞信息收集,有助于低含量细胞检测。
4.多参数检测,传统流式可实现28个参数,质谱流式可达40个参数。
5.应用领域:免疫学、细胞生物学、干细胞等。
流式细胞仪的基本结构
硬件组成:
1.液流系统:引导和聚焦细胞到检测区,包括流动室、样本流、鞘液、喷嘴等。
2.光学系统:由激光器作为光源,接收系统包括滤光片和检测通道。
3.电子系统:光电转换器将荧光信号转换为电信号,使用PMT或APD进行放大。
4.数据处理系统:计算机和专业软件,用于数据存储、分析和处理。
液流系统
1.流动室:液流系统的核心,常用材料为光学玻璃或石英。
2.样本流与鞘液:样本流携带细胞,鞘液(如PBS溶液)在流动室与样本流相遇,形成流体力学聚焦现象。
光学系统
1.光源:激光器,常见波长包括355、375、405、488、532、561和640nm。
2.光接收系统:通过滤光片区分不同波长的信号,引导至检测通道。
电子系统
1.光电转换:PMT或APD将荧光信号转换为电信号并放大。
2.信号处理:电子系统对信号进行数据处理,转换为数字信号存储。
数据处理系统详解
1.数据存储:形成矩阵形式的数据,存储为FCS或LMD格式。
2.分析软件:包括Flowjo、Kaluza等,用于数据图形化展示和统计分析。