2024/9/23 13:25:00

一、操作步骤:

1.准备细胞:选择适当的细胞系,培养并使其达到适当的生长状态。

2.准备病毒:根据你需要的病毒和浓度,制备好病毒溶液,如腺病毒、逆转录病毒等。

3.接毒:当细胞长到合适密度时,就可以进行接种(建议在细胞传代48h内进行接种,细胞密度达80-90%左右进行)。移除先前的培养液,用1*PBS洗2-3次,移除残留的PBS,然后加入适当浓度的病毒溶液,一般接毒量按最后所需加入维持液体积的10%来计算,若希望病变速度快一些,可以加大接毒量,如15%或20%。轻轻旋转或轻拍培养瓶以确保病毒溶液充分覆盖细胞。

4.吸附:将接毒后的细胞在37℃二氧化碳培养箱中静置一定时间,,使病毒充分接触细胞,。

5.收集病毒:收集病毒培养上清液,并进行病毒滴度测定。

6.细胞接种:将细胞接种于培养皿或板中,使其达到适当的细胞密度。

7.病毒感染:将适量的病毒加入培养皿或板中,与细胞进行感染。

8.孵育:将培养皿或板放入恒温培养箱中,在37℃,5%二氧化碳培养箱中进行孵育。

9.收集样本:根据实验需要,在感染一定时间后,收集样本进行后续分析。

 

二、注意事项:

1.实验室安全:在进行细胞接毒实验时,应遵循实验室的安全操作规范,戴好实验手套、口罩和护目镜,避免病毒接触皮肤和黏膜。

2.病毒处理:病毒是一种生物安全风险,应在生物安全柜中进行操作,并采取适当的消毒措施,避免病毒泄漏。

3.细胞培养条件:细胞应在适当的培养条件下进行培养,包括适当的培养基、培养温度和CO2浓度等。

4.感染时间:病毒感染时间应根据实验需要进行控制,过长或过短的感染时间都可能对实验结果产生影响。

5.病毒滴度:为了确保实验的准确性,应对病毒进行滴度测定,以确定感染细胞的适当病毒滴度。

6.实验控制:为了排除其他因素对实验结果的影响,应设置相应的对照组进行对比分析。

 

以上是细胞接毒的一般操作步骤及注意事项,具体操作还需根据实验需求和实验室条件进行调整。

 

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