蛋白定量，即蛋白质定量，是生物学实验中不可或缺的一部分，用于确定蛋白质的含量。
以下是三种常用的蛋白定量方法：
一、 Bradford法（考马斯亮蓝法）
1.原理：
在酸性溶液中，考马斯亮蓝G250染料与蛋白质中的碱性氨基酸（如精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合，导致染料的最大吸收峰位置从488nm变为595nm，颜色从棕红色变为蓝色。
结合到蛋白质分子上的染料数与蛋白质所带正电荷成正比，因此可以通过测定595nm处的吸光度来推算蛋白质的浓度。
2.特点：
灵敏度高，能够检测到微克级别的蛋白质。
操作简便，反应迅速，通常只需几分钟即可完成检测。
但由于染料主要与特定氨基酸残基结合，不同蛋白质间可能存在较大偏差。
二、BCA法（二喹啉甲酸法）
1.原理：
在碱性条件下，二价铜离子被蛋白质还原成一价铜离子，一价铜离子与BCA（bicinchoninic acid，二辛可酸）相互作用，形成紫色的反应复合物。
该复合物在562nm处具有强烈的吸光性，且吸光度与蛋白质浓度在广泛范围内呈线性关系。
2.特点：
灵敏度高，检测范围广，适用于多种类型的蛋白质。
操作便捷，通常在45分钟内可完成检测。
但结果可能受到还原剂（如DTT、巯基乙醇等）和金属离子螯合剂（如EDTA等）的干扰。
三、紫外吸收法（UV法）
1.原理：
蛋白质分子中的芳香族氨基酸（如色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸）含有可以吸收紫外光的共轭双键，最大吸收峰在280nm波长处。
通过测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度，并根据Beer-Lambert定律（A=ECl，其中A代表吸光度，E代表消光系数，C代表蛋白质浓度，l代表光径长度）来推算蛋白质的浓度。
2.特点：
操作简便，无需额外添加检测试剂，样品可回收利用。
灵敏度高，能够达到微克级别。
但由于不同蛋白质中芳香族氨基酸的含量不同，对紫外光的吸收能力也不同，因此可能需要纯品蛋白质作为标准品进行校正。此外，核酸等杂质也可能对实验结果造成干扰。
综上所述，Bradford法、BCA法和紫外吸收法各有其优缺点和适用范围，在选择具体方法时需要根据实验目的、样品特性和实验条件等因素进行综合考虑。
