在Western Blot（WB）实验中，定量结果的归一化处理是非常必要的。
归一化是实验数据处理的关键步骤，它有助于消除样本间或实验中的偏差，确保实验结果的可靠性和可比性。
一、必要性分析
1.消除偏差：WB实验中的偏差可能来源于蛋白样本浓度不均、凝胶上样不一致或转膜不完全等。这些偏差会直接影响实验结果的准确性。通过归一化处理，可以消除这些偏差，使实验结果更加可靠。
2.提高可比性：在比较不同样品中目标蛋白的相对表达量时，归一化处理能够确保各样品在相同或相似的条件下进行比较，从而提高实验结果的可比性。
3.增强说服力：归一化处理后的实验结果更加准确、可靠，能够增强实验结果的说服力，有助于后续的科学研究和论文发表。
二、归一化方法
在WB实验中，常用的归一化方法包括内参蛋白校正和总蛋白校正。
1.内参蛋白校正：选择一种在各样品中表达量相对稳定的蛋白作为内参蛋白（如GAPDH、β-tubulin、β-actin或cyclophilin B等），将每个样品中目标蛋白的灰度值除以内参蛋白的灰度值，得到目标蛋白的相对表达量。这种方法技术成熟、成本低，但需要根据不同的组织选择合适的内参蛋白，并确保内参蛋白与目的蛋白在大小、表达量等方面不产生干扰。
2.总蛋白校正：直接测量样品中总蛋白的含量，将每个样品中目标蛋白的灰度值除以总蛋白的含量，得到目标蛋白的相对表达量。这种方法适用于任何组织样本，具有更好的说服力，但需要使用额外的染料进行染色，且需要控制上样量以确保线性范围。
结论
综上所述，WB实验的定量结果必须要进行归一化处理。通过选择合适的归一化方法，可以消除实验中的偏差，提高实验结果的可比性和说服力。在实际操作中，应根据实验的具体情况和需求选择合适的归一化方法，并严格按照操作步骤进行实验和数据处理。
