一、准备工作
1.实验器材与材料：
确保所有实验器材和材料都已无菌处理，包括细胞工厂、培养基、细胞悬液、离心管、移液管等。
准备适量的培养基，并根据细胞类型和实验要求调整培养基的成分。
2.细胞工厂的选择与准备：
选择合适的细胞工厂，确保其具有满足细胞悬浮培养所需的特殊设计和功能。
在使用前对细胞工厂进行消毒处理，并按照实验要求加入适量的培养基。
二、细胞接种
1.制备细胞悬液：
从培养细胞中收集所需数量的细胞。
如果细胞处于培养状态，可以用细胞培养液洗涤细胞，并用胰酶等酶进行消化（但悬浮细胞无需胰酶消化），使细胞以单个细胞的形式存在。
使用细胞计数仪或显微镜进行细胞计数，并根据实验要求调整细胞浓度。
2.接种细胞：
将细胞悬液均匀接种到细胞工厂中，注意接种时动作要轻柔，避免产生气泡。
接种密度应保持在一定水平以上（如35%以上），以确保细胞的正常生长和繁殖。
三、培养条件控制
1.温度与湿度：
将接种好的细胞工厂放入恒温培养箱中，确保提供适宜的温度和湿度条件。
2.气体环境：
根据细胞类型和实验要求，提供适宜的气体环境（如CO2浓度）。
3.搅拌或摇动：
对于需要搅拌或摇动的细胞悬浮培养，应确保搅拌或摇动速度适中，以避免对细胞造成损伤。
四、换液与操作
1.换液时机：
当培养基颜色变黄或细胞密度达到一定水平时，需要进行换液。
2.换液方法：
将细胞悬液转移到离心管中，以低速离心使细胞沉淀。
小心地吸出上层的旧培养基，注意不要扰动细胞沉淀。
向离心管中加入适量的新鲜培养基，轻轻悬浮细胞沉淀。
将悬浮好的细胞悬液重新接种到细胞工厂中，继续培养。
五、细胞收集与传代
1.细胞收集：
当细胞达到一定密度和数量时，可以进行细胞收集。
使用适当的方法（如离心法）将细胞从细胞工厂中分离出来。
2.细胞传代：
根据实验要求，将收集到的细胞进行传代培养。
在传代过程中，应确保操作的无菌性，避免污染细胞。
六、注意事项
1.无菌操作：在整个细胞悬浮培养过程中，应严格遵守无菌操作规程，避免污染细胞。
2.细胞状态观察：定期观察细胞的生长状态，及时发现并处理异常情况。
3.培养基选择：根据细胞类型和实验要求选择合适的培养基，并定期更换新鲜培养基。
4.搅拌或摇动速度：对于需要搅拌或摇动的细胞悬浮培养，应确保搅拌或摇动速度适中，以避免对细胞造成损伤。
