稳定转染跟瞬时转染的区别
稳定转染,即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中,并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。
瞬时转染的表达,外源基因导入整合基因组的几率非常低,绝大部分以游离形式存在,导致最后拷贝数被稀释,无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染,多为瞬时转染。
一般如下情况需要构建稳定株?
1.长期在目的细胞中研究,通过构建稳定株,可以降低频繁转染或者病毒包装的成本,方便实验研究;有了稳定细胞系,后期的Co-IP或者Pull-Down实验会非常便利。
2.部分蛋白半衰期极长,瞬时RNA只能干扰表达,无法去除已经表达的目的蛋白,通过构建稳定株可以实现更好的干扰效果,可以稳定维持基因低水平表达或不表达,增加实验数据的稳定性和真实性。
3.瞬转往往会引入极高拷贝数的表达,导致因为人为因素造成实验结果的不精确,构建稳定株可以帮助进行实验研究;
4.需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的;
5.需要用细胞继续做动物实验的,比如裸鼠成瘤等,往往需要构建成稳转株。