一、原理
凝胶法内毒素检测是基于鲎试剂与内毒素之间的特异性反应。鲎试剂是从鲎的血液中提取的一种细胞溶解物，含有能识别并反应内毒素的活性成分。当革兰氏阴性细菌的内毒素与鲎试剂接触时，会激活鲎试剂中的酶原，使其转变为具有水解活性的酶。这种酶能够水解鲎试剂中的凝固蛋白，形成凝胶状的沉淀。凝胶的形成速度和坚固程度与内毒素的浓度呈正相关，因此可以通过观察凝胶的形成来判断样品中内毒素的含量。
二、详细步骤
1.物品准备
电热干燥箱、旋涡混合器、超净工作台、试管恒温仪或恒温水浴箱、鲎试剂、细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水（符合《中国药典》规定，内毒素含量小于0.015EU/mL）、实验所用器皿（需经处理去除外源性内毒素）。
2.鲎试剂灵敏度复核试验
当使用新批号的鲎试剂或试验条件改变时，需进行灵敏度复核试验。
用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品溶解，并制备成不同浓度的内毒素标准溶液。
取各浓度的内毒素标准溶液与等体积的鲎试剂混合，在37℃±1℃的恒温器中保温60分钟±2分钟。
观察凝胶形成情况，计算反应终点浓度的几何平均值，验证鲎试剂的灵敏度是否符合要求。
3.供试品干扰试验
确定供试品在多大稀释倍数下对内毒素和鲎试剂的反应无干扰作用。
使用不同稀释倍数的供试品溶液进行预实验，观察凝胶形成情况。
若存在干扰，需通过稀释、过滤、中和等方法排除干扰。
4.凝胶法操作方法
细菌内毒素标准溶液的制备：按说明书要求制备。
供试液制备：将供试品用细菌内毒素检查用水溶解，制备成适当浓度的供试液。
混合与保温：取等体积的鲎试剂与内毒素标准溶液或供试液混合，轻轻混匀后，封闭管口，在37℃±1℃的恒温器中保温60分钟±2分钟。
结果观察：将试管从恒温器中取出，缓缓倒转180°。若管内形成凝胶，且凝胶不变形、不从管壁滑脱，则为阳性反应；若未形成凝胶或凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱，则为阴性反应。
5.结果判断
若阴性对照管为阴性，阳性对照管为阳性，且试验有效，则根据供试品管的凝胶形成情况判断其是否符合规定。
若供试品管为阴性，则判定供试品符合内毒素限量要求；若为阳性，则判定不符合要求。
三、注意事项
1.试验操作应在清洁环境中进行，防止内毒素污染。
2.使用移液器取样时，避免将气体吹入溶液中。
3.试验人员应做好防护，避免割伤或内毒素感染。
4.实验所用器皿需经处理去除外源性内毒素。
