脂肪的染色方法

脂肪染色常用脂溶性色素，如苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、油红O等。这些染料既能溶于有机溶剂（如乙醇、丙酮），又能溶于脂肪。由于这类染料在脂质中的溶解度较大，染色时染料会从染液中转移到被染的脂质中，使脂质呈现出染液的颜色。主要用于显示组织脏器的脂肪变性和类脂质的异常沉着。

苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染色法：

1.固定与切片：将组织固定于10%甲醛中，然后水洗并采用冰冻或石蜡切片。

2.染色：切片经蒸馏水处理后，浸染于Harris苏木素或明矾苏木素中淡染1~2分钟，自来水冲洗后，移入70%酒精5秒钟，再投入苏丹Ⅲ染液中约30分钟或更长时间（可置于56℃温箱中加速染色）。

3.分化与封固：在70%酒精中洗涤5~10秒钟（洗去浮色），蒸馏水冲洗后，将切片移于载玻片上，擦去周围水分，用甘油明胶封固。

4.结果判定：脂肪呈橙红色或鲜红色（有时也可能呈黑色），胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。

油红O染色法：

1.固定与漂洗：先小心倒掉培养基，用PBS漂洗1次，每次5分钟，然后加4%甲醛固定10分钟，再用PBS漂洗两次，每次5分钟。

2.染色工作液配置：将30mL油红O储备液和20mL双蒸水混匀（现用现配，可能出现不溶颗粒，离心取上清即可，室温稳定15分钟）。

3.染色与漂洗：用油红O染色工作液孵育样本15分钟，然后用脱色液A漂洗2次（每次添量盖过组织或细胞即可），每次5分钟，再用脱色液B漂洗2次，每次5分钟。

结缔组织的染色方法

结缔组织主要包括胶原纤维、弹性纤维和网状纤维，它们的染色方法各有不同。

胶原纤维的染色方法：

Masson三色染色法：

1.染色步骤：组织切片脱蜡至水，用Weigert铁苏木素染色液染色，酸性乙醇分化液分化，Masson蓝化液返蓝，然后依次用丽春红品红染色液、磷钼酸溶液和苯胺蓝染色液染色，最后脱水透明，中性树胶封固。

2.结果判定：胶原纤维、黏液、软骨呈蓝色（如用亮绿液染色则为绿色），胞质、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。

Van Gieson苦味酸酸性复红法：

1.染色步骤：组织切片脱蜡水洗后，用Weigert苏木素液染细胞核，自来水洗涤，显微镜检查细胞核着色程度，必要时用0.5%盐酸乙醇分化，然后水洗至变蓝，再用Van Gieson液染色，最后用95%乙醇分化和脱水，无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2.结果判定：胶原纤维呈深粉红色，肌纤维、胞浆及红细胞黄色，细胞核呈棕黑色或蓝黑色。

弹性纤维的染色方法（醛品红染色法）：

1.染色步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，用Lugol碘处理，稍水洗后，用70%乙醇稍洗，再用醛品红染10分钟，之后用70%乙醇浸洗2次（每次约30秒），至切片不再脱色为止，稍水洗，再用橙黄G染液淡染，稍水洗，最后常规乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2.结果判定：弹力纤维深紫色，黏液紫色（肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、垂体B细胞等均能同时着色），背景呈不同程度的黄色。

网状纤维的染色方法（Wider染色法或Gomori银染法）：

1.Wider染色法：

染色步骤：组织切片脱蜡至水，用10%磷钼酸处理，蒸馏水冲洗后，用1%硝酸铀处理，再用蒸馏水冲洗，然后用氧化银溶液处理，95%乙醇速洗，还原液还原，蒸馏水冲洗，0.2%氯化金调色，蒸馏水冲洗，5%次亚硫酸钠处理，蒸馏水冲洗，最后用核固红染细胞核，常规无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

结果判定：网状纤维呈黑色，细胞核呈红色。

2.Gomori银染法：

染色步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，用高锰酸钾液氧化，自来水洗后，用硫酸铁铵液媒染，水洗并蒸馏水洗后，用Gomori银氨液处理，蒸馏水洗后，用10%甲醛液还原，蒸馏水浸洗，最后常规乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

结果判定：网状纤维呈黑色，核灰色，其他组织呈对比染色的颜色。