一、免疫亲和色谱-ELISA方法
亲和色谱分离提纯乙酰化蛋白
步骤：
1.用细胞裂解液裂解细胞，离心取上清备用。
2.取适量抗乙酰化赖氨酸抗体填料，用PBS洗涤。
3.将细胞裂解上清液与洗好的填料混匀，在旋转摇床低速孵育。
4.离心去上清，用PBSt重悬沉淀并重复离心去上清，最后一次用PBS洗涤并吸弃上清。
注意：细胞裂解液里应含有蛋白酶抑制剂、组蛋白乙酰化酶抑制剂等。
释放及包被固定分离提纯的乙酰化蛋白
步骤：
1.用HCl将抗赖氨酸抗体填料-乙酰化蛋白复合物煮沸，离心取上清液转移到含有Na2CO3的ELISA薄板上孵育。
2.取出ELISA薄板，拍干并用PBSt清洗，加入含BSA的PBSt封闭。
3.再次拍干并用PBSt清洗，加入抗赖氨酸抗体HRP偶联复合物孵育。
4.拍干并用PBSt清洗板孔，加入TMB液孵育显色，最后加入H2SO4终止反应，在450nm波长下读数。
二、其他常用方法
1.免疫印迹法
原理：利用特异性抗体检测目标蛋白的乙酰化状态，通过条带强度估计乙酰化程度。
优点：能够特异性检测目标蛋白的乙酰化状态。
缺点：对蛋白量和抗体质量要求较高，且无法提供乙酰化位点的确切位置。
2.质谱分析
原理：利用质谱仪精确鉴定乙酰化位点，并定量分析乙酰化程度。
优点：提供精确的乙酰化位点信息，定量精度高。
缺点：技术要求高，成本相对较高。
3.免疫荧光定量法
原理：使用荧光标记的乙酰化特异性抗体，通过荧光显微镜观察乙酰化蛋白的分布。
优点：可以直观观察蛋白质在细胞中的位置和分布。
缺点：无法提供定量数据，且对荧光标记和显微镜设备有一定要求。
4.酶联免疫吸附试验（ELISA）
原理：使用特异性抗体检测和定量特定蛋白质的乙酰化水平。
优点：操作简单，适合批量检测和快速筛选。
缺点：灵敏度和特异性依赖于抗体质量。
