一、消化液

1. 种类：

胰蛋白酶：

来源：主要来源于牛、猪等动物的胰脏，也可通过重组大肠杆菌表达生产。

作用机制：特异性水解碱性氨基酸（如精氨酸和赖氨酸）的羧基参与的肽键，使细胞间的蛋白质水解，从而使细胞分散。

适用范围：适用于消化细胞间质较少的软组织，但对纤维组织和硬癌组织效果较差。在组织解离时，常与其他酶（如胶原酶）联合使用。

使用注意事项：在pH=8.0、37℃时效果最佳；Ca²⁺、Mg²⁺和血清会降低其活力，因此常用无Ca²⁺、Mg²⁺的溶液配制，消化结束后用血清终止反应。

Accutase消化液：

来源：非动物源性的细胞消化酶。

作用机制：包含多种蛋白酶和其他酶类，通过水解细胞间和细胞与培养器皿表面的多种蛋白质成分来分离细胞。

特点：作用机制复杂，能在不损伤细胞表面抗原和细胞活力的情况下有效地消化细胞。

胶原酶：

来源：主要从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备。

作用机制：主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。

分类：分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等不同类型，需根据所要分离消化的组织类型选择。

适用范围：适于消化分离纤维性组织、上皮和较硬的癌组织。

特点：对胶原的消化作用强，仅对细胞间质有消化作用而对细胞损害不大。

2. 作用：

组织块解离：在细胞培养前，消化液用于将组织块解离成单个细胞或细胞团，以便进行后续培养。

传代培养：在细胞传代过程中，消化液用于使贴壁细胞脱离培养器皿表面，形成细胞悬液，便于分装到新的培养瓶中继续培养。

 

二、培养基

1. 种类：

RPMI-1640 Medium：

特点：广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞、杂交瘤细胞的培养。

主要用途：主要用于悬浮细胞培养。

Minimum Essential Medium (MEM)：

成分：仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。

特点：成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。

DMEM-高糖：

特点：可用于许多哺乳动物细胞培养，更适合高密度悬浮细胞培养。

适用范围：适用于附着性较差，但又不希望其脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

DMEM-低糖：

特点：可用于许多哺乳动物细胞培养。

适用范围：低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

DMEM/F12：

特点：适于克隆密度的培养。

适用范围：该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。

Ham’s F-12培养基：

特点：可以在加入很少血清的情况下应用。

适用范围：特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基础培养液。

2. 作用：

提供营养：为细胞生长提供必要的氨基酸、维生素、无机盐和碳源（如葡萄糖）等营养物质。

调节环境：调节培养物的pH值和渗透压，维持细胞生长的稳定环境。

支持生长：含有生长因子和激素等成分，支持细胞的正常生长和增殖。

 

三、细胞因子

1. 种类：

白介素 (IL)：

种类：如IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-8等。

功能：参与免疫调节、炎症反应和细胞分化。

趋化因子 (Chemokines)：

种类：如CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL8等。

功能：引导细胞定向迁移，参与免疫和炎症反应。

干扰素 (IFN)：

种类：如IFN-gama、IFN-a1a、IFN-a1b等。

功能：具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能。

肿瘤坏死因子 (TNF)：

种类：如TNF-α、TNF-β等。

功能：诱导肿瘤细胞凋亡、参与炎症。

集落刺激因子 (CSF)：

种类：如GM-CSF、G-CSF、M-CSF等。

功能：刺激造血干细胞增殖和分化。

神经营养因子：

种类：如NRG1-β2、GDNF、OSM等。

功能：促进神经细胞生长、存活和修复。

生长因子：

种类：如FGF、TGF-β、VEGF、PDGF等。

功能：刺激细胞生长、增殖和分化过程。

2. 作用：

调控细胞行为：通过结合特定的细胞表面受体，激活细胞内的信号转导通路，从而调控细胞的增殖、分化、代谢和凋亡等生物学过程。

促进细胞生长：刺激细胞分裂和增殖，增加细胞数量。

维持细胞活性：减少细胞凋亡，提高细胞存活率。

促进细胞贴壁与迁移：有助于细胞在培养皿上的贴壁和迁移，便于细胞的培养和扩增。

 

综上所述，消化液、培养基和细胞因子在细胞培养的全流程中各自发挥着不可或缺的作用。通过合理选择和使用这些试剂，可以有效地促进细胞的正常生长和增殖，为细胞实验和生物医学研究提供可靠的保障。