类器官 RNA 提取方法（以超纯总 RNA 快速提取试剂盒为例）
一、试剂准备
超纯总 RNA 快速提取试剂盒（含 DNase I），货号 abs60026。
其他所需试剂和器材，如氯仿、异丙醇、75%乙醇、无 RNase 的水或 0.5%SDS（溶液均需用 DEPC 处理过的水配制）、无酶枪头、无酶 EP 管、加样枪、EP 管架、水浴锅、高速低温离心机等。
二、类器官收集及洗涤
1.类器官收集：移液器吸去培养基，每孔添加 1~2mL 左右 4℃类器官传代培养缓冲液（abs9730），轻柔吹打基质胶，收集在 15mL 离心管中（24 孔板，每 5 孔为一组），4℃静置 10min 或-20℃放置 5min（目的是使基质胶软化），300g，4℃，离心 5min 弃上清。
2.类器官清洗：添加 1mL 类器官传代培养缓冲液重悬，转移到 1.5mL EP 管，300g，4℃，离心 5min 弃上清。
三、RNA 提取步骤
1.细胞裂解：向含类器官沉淀的 EP 管中加入 1mL 的 RL（试剂盒组分）溶解细胞，并用移液枪轻轻吹打混匀，使 RL 充分和类器官接触裂解细胞并灭活 RNA 酶。
2.核蛋白体分解：将匀浆样品剧烈震荡混匀，在 15~30℃条件下孵育 5min 以使核蛋白体完全分解。
3.氯仿萃取：每 1mL RL 加 0.2mL 氯仿。盖紧样品管盖，剧烈振荡 15sec 并将其在室温下孵育 3min。
4.离心分层：于 4℃，12000rpm 离心 10min，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 存在于水相中。水相层的容量大约为所加 RL 体积的 60%，把水相转移到新管中，进行下一步操作。
5.沉淀 RNA：加入 1 倍体积 70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇！），颠倒混匀（此时可能会出现沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱 RA 中（吸附柱套在收集管内）。
6.洗涤：
12000rpm 离心 45sec，弃废液，将吸附柱重新套回收集管。
加 400μL 去蛋白液 RE，12000rpm 离心 45sec，弃废液。
向吸附柱 RA 中央加入 80μL DNase I 工作液（取 10μL DNase I 储存液放入新的 RNase-free 离心管中，加入 70μL RDD 溶液，轻柔混匀配制而成），室温放置 15min（一般情况下室温放置可得到较好的消化效果，如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15min）。
加 400μL 去蛋白液 RE，12000rpm 离心 45sec，弃掉废液。
加入 500μL 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇！），12000rpm 离心 45sec，弃掉废液。
再次加入 500μL 漂洗液 RW，12000rpm 离心 45sec，弃掉废液。
7.干燥与洗脱：将吸附柱 RA 放回空收集管中，12000rpm 离心 2min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量往吸附膜的中间部位加 50~80μL RNase free H2O（事先在 65℃水浴中加热效果更好），室温放置 2min，12000rpm 离心 1min，所得溶液即为 RNA 溶液。如果需要较多 RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心 1min。
四、RNA 保存与应用
提取得到的 RNA 溶液，可以直接应用于 Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。
类器官蛋白提取方法（以细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒为例）
一、试剂准备
细胞浆、细胞核及细胞膜蛋白抽提试剂盒（abs9346）。
其他所需试剂和器材，如磷酸酶抑制剂 II、蛋白酶抑制剂 PMSF、移液器、离心机等。
二、溶液准备
室温融解试剂盒中的各种溶液，溶解后除结构蛋白提取液外，其他试剂立即置于冰上。
结构蛋白提取液溶解后，可放置于 37℃水浴中温浴至透明后，常温放置。
三、蛋白提取工作液准备
1.胞浆蛋白提取工作液：临用前，根据处理样品的量估算实验时胞浆蛋白提取液的需要量，并分别按照 1:50 比例加入磷酸酶抑制剂 II 和 1:100 比例加入蛋白酶抑制剂 PMSF。
2.胞核蛋白提取工作液：临用前，根据处理样品的量估算实验时胞核蛋白提取液的需要量，并分别按照 1:50 比例加入磷酸酶抑制剂 II 和 1:100 比例加入蛋白酶抑制剂 PMSF。
3.膜蛋白提取工作液：临用前，根据处理样品的量估算实验时膜蛋白提取液的需要量，并分别按照 1:50 比例加入磷酸酶抑制剂 II 和 1:100 比例加入蛋白酶抑制剂 PMSF。
4.结构蛋白提取工作液：临用前，根据处理样品的量估算实验时结构蛋白提取液的需要量，并分别按照 1:50 比例加入磷酸酶抑制剂 II 和 1:100 比例加入蛋白酶抑制剂 PMSF。
四、类器官收集及洗涤
1.类器官收集：移液器吸去培养基，每孔添加 1~2mL 左右 4℃类器官传代培养缓冲液（abs9730），轻柔吹打基质胶，收集在 15mL 离心管中（24 孔板，每 5 孔为一组），4℃静置 10min 或-20℃放置 5min（目的是使基质胶软化），300g，4℃，离心 5min 弃上清。
2.类器官清洗：添加 1mL 类器官传代培养缓冲液重悬，300g，4℃，离心 5min 弃上清。
五、蛋白提取步骤
1.胞浆蛋白提取：
向含类器官沉淀的 EP 管中加入 2mL 的胞浆蛋白提取工作液，在 4℃条件下震荡 20min。
准备 1~5mL 的注射器，用注射器吹打步骤 1 震荡过的溶液 50~90 次，在 4℃条件下，15000g 离心 10min。取上清液存于 EP 管中，即为胞浆蛋白。
胞核蛋白提取：取胞浆蛋白提取后获得的沉淀物加入 4mL 冰浴的胞浆蛋白提取工作液，在 4℃条件下震荡 5min，4℃条件下 15000g 离心 10min，弃去上清液，沉淀物中加入 1mL 冰冻的胞核蛋白提取工作液，在 4℃条件下震荡 5min，4℃条件下 15000g 离心 10min，上清液为细胞核蛋白，转入 EP 管并保存。
2.胞膜蛋白提取：在胞核蛋白提取后的沉淀物中加入 1mL 冰冻的膜蛋白提取工作液，在 4℃条件下震荡 5min，4℃条件下 15000g 离心 10min，上清液为细胞膜蛋白，转入 EP 管并保存。
3.结构蛋白提取：在胞膜蛋白提取后的沉淀物中加入常温或 37℃水浴过的透明的结构蛋白提取工作液 0.5mL，4℃条件下震荡 5min，4℃条件下 15000g 离心 10min，保存上清液即为细胞骨架蛋白。
六、蛋白保存与应用
待检测浓度的蛋白存于-70℃，可以用于 Western、EMSA、footprinting、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
