一、准备工作
1.基质胶解冻：将基质胶放置在4°C的环境或冰上预冷过夜，以避免其凝固。
2.培养容器预热：将24孔板或其他培养容器放置于培养箱中预热，确保容器温度适宜。
3.试剂与器具准备：准备所需的移液枪头、离心管、培养液等试剂，并确保所有实验器具都已消毒并无污染。
二、基质胶铺胶
1.基质胶分装：使用预冷的枪头将解冻的基质胶进行分装，避免形成气泡。
2.细胞悬液准备：准备病人或动物组织（或类器官）来源的单细胞悬液，细胞总数通常为1×10^5个。将细胞悬液进行离心处理，以去除上清液。
3.基质胶与细胞混合：取适量基质胶（如50µL的OrganoGel基质胶）与离心所得的细胞进行混匀，确保细胞均匀分布在基质胶中。
4.铺胶：立即将基质胶与细胞的混合物滴加在预热的24孔板或其他培养容器中，确保基质胶均匀覆盖整个容器底部。
三、培养与观察
1.培养箱放置：将铺好基质胶的培养容器迅速放入37°C的培养箱中，等待基质胶凝固。
2.添加培养液：约10分钟后，当基质胶凝固后，向培养容器中加入适量的类器官培养基（如500µL）。
3.培养与观察：将培养容器继续放置在培养箱中进行培养，并定期观察类器官的生长情况和形态变化。
四、注意事项
1.温度控制：在基质胶铺胶过程中，需要严格控制温度，避免基质胶过早凝固或形成气泡。
2.无菌操作：所有操作应在无菌条件下进行，以避免微生物污染。
3.操作迅速：基质胶与细胞的混合物需要迅速铺胶，以避免细胞在体外时间过长而影响其活性。
4.基质胶选择：根据实验需求选择合适的基质胶类型，如低因子、无酚红等。
5.培养条件优化：根据类器官的类型和培养需求，优化培养条件，如温度、湿度、CO₂浓度等。
