一、成分差异
1.细胞裂解液(通常指变性裂解液)
强去垢剂:如SDS(十二烷基硫酸钠),可破坏细胞膜和蛋白质结构,使蛋白质完全变性。
高盐或离液剂:如尿素或盐酸胍,进一步促进蛋白质解离。
可能含还原剂:如DTT或β-巯基乙醇,打断二硫键以彻底变性蛋白质。
2.天然细胞裂解液
温和去垢剂:如Triton X-100或非离子型去垢剂,仅破坏细胞膜而保留蛋白质天然构象。
低盐缓冲液:维持生理pH和离子强度,避免蛋白质聚集或沉淀。
无还原剂:不添加打断二硫键的试剂,确保蛋白质保持天然氧化状态。
二、用途差异
1.细胞裂解液(变性裂解液)
应用场景:主要用于SDS-PAGE、Western Blot等需要蛋白质完全变性的实验。
优势:通过彻底变性使蛋白质以线性形式展开,便于分子量分析和抗体识别。
2.天然细胞裂解液
应用场景:适用于ELISA、免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白质相互作用研究等需要保留蛋白质功能的实验。
优势:维持蛋白质的天然构象和活性,确保抗原表位或结合位点不被破坏。
三、对蛋白质的影响
1.细胞裂解液(变性裂解液)
蛋白质状态:完全变性,失去天然构象和生物活性。
后续分析:适用于检测蛋白质表达量或分子量,但无法研究蛋白质功能或相互作用。
2.天然细胞裂解液
蛋白质状态:保留天然构象和生物活性。
后续分析:适用于研究蛋白质功能、相互作用或酶活性,但可能因蛋白质聚集导致部分损失。
四、选择建议
若需分析蛋白质分子量或进行Western Blot:选择细胞裂解液(变性裂解液)。
若需研究蛋白质功能、相互作用或酶活性:选择天然细胞裂解液。
五、总结对比表
特性 |
细胞裂解液(变性) |
天然细胞裂解液 |
主要成分 |
强去垢剂、高盐、还原剂 |
温和去垢剂、低盐缓冲液 |
蛋白质状态 |
完全变性,失去活性 |
保留天然构象和活性 |
典型用途 |
SDS-PAGE、Western Blot |
ELISA、Co-IP、酶活性测定 |
优势 |
彻底变性,便于分子量分析 |
保留功能,适用于功能研究 |
局限性 |
无法研究蛋白质功能 |
可能因聚集导致蛋白质损失 |
关键点:选择裂解液时需明确实验目的,若需保留蛋白质功能则优先使用天然裂解液,若仅需分析蛋白质表达量则选择变性裂解液。