一、鼠尾胶原蛋白在细胞培养器皿的表面包被上的应用
1.作用：
鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养细胞表面粘附性，特别适合那些在普通培养器皿表面不易贴壁的细胞，如成纤维细胞、肝细胞等原代细胞。
通过调整包被厚度（如薄层或三维凝胶），可以调控细胞形态和极性，例如促进神经细胞突触延伸或肝细胞极性分化。
2.推荐浓度：
组织培养器皿的表面包被推荐浓度为1~5μg/cm²，起始浓度可首选5μg/cm²，但建议根据具体细胞类型来优化。
3.包被步骤：
根据自身实验体系以及优化后的包被浓度来计算所需的胶原蛋白量，并加入相应孔内，确保胶原蛋白溶液完全覆盖表面。
室温孵育1小时，小心吸掉多余液体，用无菌PBS清洗3~4次后直接使用。或者加完胶原蛋白溶液后，在超净台内开盖过夜晾干。
无菌条件下，包被好的器皿在4~25℃至少可保存3个月。
二、三维胶原的制备方法
1.不含细胞的三维胶原制备（以配制1mL，1mg/mL三维胶为例）：
将200μL鼠尾胶原蛋白I型（5mg/mL）加到置于冰浴的离心管中，加入690μL无菌水。
然后加到12μL 0.1M NaOH中（注意：该步骤不能反，如果反过来把12μL 0.1M NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。
再加入100μL 10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试）。
将培养器皿在室温（25℃左右）下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。
2.含细胞的三维胶原制备（以配制1mL，1mg/mL三维胶为例）：
准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。
将200μL鼠尾胶原蛋白I型（5mg/mL）加到12μL 0.1M NaOH中（注意：该步骤不能反），立即混匀。
再加入23μL 10×PBS或10×培养液，混匀（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试）。
加入760μL的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。
将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。
