一、微生物接种技术

1. 常用方法

平板划线法

操作：用接种环蘸取菌液，在固体培养基表面分区划线（如四格法、放射法），逐步稀释微生物至单个细胞形成菌落。

用途：分离纯化混合菌，观察菌落特征。

注意：划线时接种环与平板呈40°~45°角，避免划破琼脂。

涂布法

操作：将稀释后的菌液均匀涂布于凝固的琼脂平板。

用途：菌落计数或分离纯化。

注意：需梯度稀释菌液，涂布后需静置使菌液渗入培养基。

倾注法

操作：菌液与融化冷却的培养基混合后倒入平板。

用途：菌落总数计数。

注意：不适用于严格好氧菌或热敏感菌。

液体接种法

操作：用无菌吸管或移液枪将菌液转移至液体培养基。

用途：微生物大量繁殖或生理生化研究。

穿刺接种法

操作：用接种针穿刺半固体培养基，研究微生物动力或保存厌氧菌。

用途：观察细菌运动性或厌氧培养。

斜面接种法

操作：在斜面培养基上划线，用于保存菌种或观察生化特性。

2. 接种工具与无菌操作

工具：接种环、接种针、涂布棒、移液管等。

无菌要求：在酒精灯火焰附近或无菌室内操作，避免污染。

 

二、微生物分离纯化技术

1. 核心方法

倾注平板法

步骤：稀释菌液→与培养基混合→凝固后培养→挑选单菌落重复操作。

用途：从混杂菌群中分离纯培养物。

涂布平板法

步骤：稀释菌液→涂布于平板→培养后挑选单菌落。

用途：分离纯化或检测化学因素对微生物的抑制效应。

平板划线法

步骤：分区划线稀释微生物→培养后获得单菌落。

用途：分离混合菌中的单一菌株。

富集培养法

原理：创造特定条件（如营养、pH、温度），使目标微生物成为优势种群。

用途：分离少量或生长缓慢的微生物。

厌氧培养法

操作：加热培养基驱逐氧气、使用N₂/CO₂置换气体或密封装置。

用途：培养专性厌氧菌。

单细胞分离法

操作：显微镜下用毛细管或显微针挑取单个细胞培养。

用途：从混杂群体中直接分离纯培养物。

2. 方法选择

好氧菌：优先使用平板划线法或涂布法。

厌氧菌：需结合厌氧培养装置。

寄生菌：接种至敏感宿主细胞群体。

 

三、微生物培养技术

1. 培养基制备

成分选择：

合成培养基：纯化学试剂配制（如葡萄糖、蛋白胨）。

天然培养基：动植物组织浸液（如牛肉膏蛋白胨培养基）。

综合培养基：天然与化学成分混合（如马铃薯葡萄糖琼脂）。

类型：

固体培养基：含琼脂（1.5%~2%），用于分离纯化。

液体培养基：用于大量繁殖或振荡培养。

半固体培养基：琼脂浓度0.5%~1%，观察微生物运动性。

2. 培养条件控制

温度：

细菌：37℃（如大肠杆菌）。

真菌：25℃~28℃（如酵母菌）。

pH值：多数微生物适应中性或微酸性（pH 6.5~7.5），特殊菌种需调整。

氧气需求：

好氧菌：振荡培养或通气。

厌氧菌：使用厌氧培养箱或密封装置。

兼性厌氧菌：灵活调整氧气条件。

3. 应用领域

食品工业：发酵生产（酸奶、面包）、食品保鲜（乳酸菌抑菌）。

医药领域：抗生素生产（青霉菌）、疫苗制备（灭活病毒）。

环境科学：土壤修复（石油降解菌）、污水处理。

基础研究：微生物生理代谢、遗传变异研究。

 

四、关键注意事项

1.无菌操作：全程在无菌室或火焰附近进行，避免杂菌污染。

2.接种工具灭菌：接种环使用前需火焰灼烧灭菌。

3.培养条件优化：根据微生物特性调整温度、pH、氧气等参数。

4.纯培养验证：通过菌落形态、显微镜观察确认纯化结果。

 

以上技术为微生物学研究提供了基础工具，具体应用需结合实验目标及微生物特性灵活选择。