一、冻存管选择原则
1.材质选择
聚丙烯（PP）：耐化学腐蚀、温度稳定性强，适用于液氮环境（-196℃）。
聚乙烯（PE）：柔软耐低温，但耐化学性稍弱。
聚偏氟乙烯（PETE）：透明度高，便于观察样品，但成本较高。
2.规格与容量
常用规格：0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL，根据样品量选择（如2.0 mL管最多装1.6 mL液体）。
双层管：适用于长期保存，外层真空层减少温度波动。
3.管盖设计
内旋盖：带硅胶垫，密封性强，适合液氮气相保存。
外旋盖：便于标记，适合冰箱冻存。
二、样品装载与标记
1.冻存液配制
常用保护剂：10% DMSO（细胞）或甘油（细菌），避免冰晶损伤样品。
配制时需在无菌条件下操作，4℃预冷后使用。
2.样品处理
细胞：离心去上清，用冻存液重悬至密度1×10⁶~1×10⁷ cells/mL。
细菌：制备菌悬液，调整OD600至0.6~0.8。
3.分装与标记
分装至冻存管后，标记名称、日期、操作者及储存位置。
使用防水标签或电子标签，避免字迹模糊。
三、低温保存条件
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保存环境 |
适用场景 |
保存期限 |
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室温（25℃） |
未使用的新冻存管 |
≤12个月 |
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4℃冰箱 |
短期保存（如当天使用） |
≤7天 |
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-20℃冰箱 |
菌株、DNA等生物样品 |
6~12个月 |
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-80℃超低温冰箱 |
细胞、蛋白等长期保存 |
1~2年 |
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液氮气相层（-150℃） |
长期保存（如细胞系、菌种） |
≥10年（需定期补加液氮） |
四、解冻与复苏规范
1.安全操作
佩戴防冻手套和护目镜，防止液氮冻伤或爆管飞溅。
从液氮罐取出后，先倒置10秒排液氮，再浸入37℃水浴。
2.快速解冻
水浴时间：1~2分钟（残留少量冰核时取出）。
立即用预热培养基稀释（如细胞需逐步升温至37℃）。
3.复苏后处理
细胞：离心去冻存液，换新鲜培养基培养。
细菌：划线接种至琼脂平板，37℃培养过夜。
五、使用注意事项
1.防止污染
冻存前紫外照射超净台30分钟，操作全程无菌。
避免反复冻融（最多2~3次）。
2.避免爆管
禁止将冻存管浸入液氮液相，应置于气相层。
拧紧管盖至有阻力感，但避免过度用力。
3.温度均匀性
使用程控降温仪（降温速率1℃/min），或-80℃预冷24小时后再转液氮。
避免冻存管接触液氮罐内壁（温度梯度大）。
4.库存管理
建立电子台账，记录冻存位置、时间、使用者。
定期检查液氮罐液位，确保样品始终浸泡在气相中。
六、常见问题处理
爆管：选择内旋盖冻存管，确保密封性；避免直接浸入液氮。
样品降解：优化冻存液配方（如增加血清浓度）；减少冻融次数。
标签脱落：使用激光打印标签或电子标签，避免手写模糊。
遵循以上规范可最大限度延长样品保存时间，确保实验结果的可靠性。对于特殊样品（如干细胞、病毒），建议参考具体实验方案或咨询试剂供应商。
