实验步骤
1.组织准备：
脐带取材后，可在磷酸盐缓冲液（PBSA）中保存1~24小时。
除去脐带血管，将Wharton胶剪成大约0.5厘米的小组织块。
将剪碎的组织块转移到50毫升离心管中，用无血清DMEM培养基洗涤，室温下以250g离心5分钟。
2..组织消化：
倒掉上清液，将离心后的沉淀物拍散，浸泡在0.1%胶原酶（用PBSA配制，大约是沉淀物体积的3倍）中，37℃下消化16~18小时。
加入适当体积的PBSA（消化液体积的2倍），室温下以250g离心5分钟。
倒掉上清液，加入2.5%胰蛋白酶（大约是沉淀物体积的2倍），37℃下处理30分钟，期间轻轻搅动。
加入适当体积的胎牛血清（FBS，消化酶体积的10%）以中止胰蛋白酶的作用。
3.细胞收集与接种：
用培养基洗涤消化后的细胞。
用培养基重悬分离得到的细胞，按大约1×10³个细胞/cm²的密度将细胞接种到培养瓶中。
注意事项
1.无菌操作：整个实验过程需要严格遵守无菌操作规范，以防止细胞污染。
2.消化条件：消化酶的种类、浓度、消化时间和温度等条件需要根据具体实验进行优化，以确保最佳的消化效果。
3.细胞活性：在消化过程中，需要密切关注细胞的活性状态，避免过度消化导致细胞损伤或死亡。
4.细胞培养：接种后的细胞需要在适宜的培养条件下进行培养，包括温度、湿度、CO₂浓度等，以促进细胞的生长和增殖。
应用与优势
酶消化法从Wharton胶中分离干细胞具有操作相对简便、分离效率较高、对细胞损伤较小等优点。分离得到的干细胞可用于基础研究、临床应用等多个领域，如疾病模型建立、药物筛选、组织工程等。
