紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理是基于蛋白质分子中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸残基对紫外光的吸收特性。这些氨基酸在280nm波长处具有特征性的最大吸收峰，且在此波长下，蛋白质溶液的吸光度与其浓度成正比关系。利用这一特性，可以通过测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度来定量测定蛋白质的含量。
具体测定方法如下：
1.仪器准备：打开紫外分光光度计，预热并进行自检，确保仪器状态良好。
2.波长设置：将仪器的波长调整到280nm，这是蛋白质紫外吸收的最大波长。
3.样品准备：将待测蛋白质溶液和空白对照溶液（通常是溶剂或缓冲液）分别加入比色皿中。
4.调零：使用空白对照溶液进行调零，以消除溶剂或缓冲液对吸光度测定的影响。
5.测定吸光度：将装有待测蛋白质溶液的比色皿放入分光光度计中，测定其在280nm处的吸光度。
6.计算浓度：根据事先绘制的标准曲线或已知的消光系数，利用测得的吸光度值计算蛋白质的浓度。
优缺点分析：
1.优点：
简便快速：操作相对简单，测定速度快，适合大量样品的初步筛选。
不消耗样品：测定过程中不消耗样品，测定后样品仍可回收使用。
灵敏度较高：对于低浓度的蛋白质溶液也能进行测定。
2.缺点：
准确度有限：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，因此测定的准确度可能受到影响。
干扰因素多：样品中如果含有其他能吸收紫外光的物质（如核酸、嘌呤、嘧啶等），会对测定结果产生干扰。
需要标准曲线：为了准确测定蛋白质浓度，通常需要事先绘制标准曲线或使用已知的消光系数。
注意事项：
1.pH值影响：蛋白质的吸收峰位置可能受溶液pH值的影响，因此在测定时应保持样品和标准曲线的pH值一致。
2.干扰校正：如果样品中存在干扰物质，可以通过校正表或其他方法进行校正，以提高测定的准确性。
3.仪器校准：定期校准分光光度计，确保测定的准确性。
