质粒DNA的提取
质粒DNA的提取方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等。
以下是碱裂解法提取质粒DNA的基本步骤：
1.培养细菌：将含有质粒的细菌（如大肠杆菌）接种到LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜（12~16小时）。
2.收集菌体：取适量菌液加入离心管，离心后弃上清，留下菌体沉淀。
3.重悬菌体：加入溶液I（含葡萄糖和EDTA），震荡混匀，使菌体悬浮起来。
4.裂解细胞：加入溶液II（NaOH和SDS），轻轻颠倒混匀，使细胞壁裂解，质粒DNA释放。
5.中和与沉淀：迅速加入预冷的溶液III（含乙酸钾），中和NaOH并沉淀蛋白质和细胞碎片。
6.离心分离：高速离心后，质粒DNA在上清中，细胞碎片和蛋白质在管底。
7.纯化质粒：通过吸附、洗涤等步骤去除杂质，最终得到纯净的质粒DNA。
质粒DNA的电泳鉴定
电泳鉴定是评估质粒DNA分子量和纯度的重要方法。
以下是电泳鉴定的基本步骤：
1.制备凝胶：通常使用0.7%~1.2%的琼脂糖凝胶，加入电泳缓冲液后倒入电泳槽中，待其凝固后拔出梳子，形成加样孔。
2.加样：将待测的质粒DNA样本与上样缓冲液混合后，加入加样孔中。同时准备DNA分子量标准品（DNA Marker），用于估算未知DNA的大小。
3.电泳：连接电泳仪，设置适当的电压和时间进行电泳。在电泳过程中，DNA片段会根据其大小和电荷在凝胶中迁移，形成不同的条带。
4.观察与拍照：电泳结束后，取出凝胶，使用紫外线灯或凝胶成像系统观察DNA条带。比较待测样本DNA条带与DNA Marker中条带的位置，估算质粒DNA的大小。同时，观察条带的清晰度和锐利度，评估质粒DNA的纯度。
注意事项
1.实验准备：穿上实验服，戴上手套和口罩，保持台面整洁，无菌操作是关键。
2.操作轻柔：在提取和电泳过程中，操作要轻柔，避免DNA断裂或降解。
3.溶液现配现用：某些溶液（如溶液II）需要现配现用，避免失效。
4.防止污染：确保所有溶液和工具无RNase污染，保护RNA完整性。
5.电泳条件：根据凝胶浓度和所需分辨率设定适当的电压和时间，确保电泳效果。
