一、优化表达系统
1.选择合适的表达系统：
根据蛋白质的性质和需求，选择真核或原核表达系统。真核表达系统（如哺乳动物细胞、昆虫细胞）更适合表达需要复杂翻译后修饰的蛋白质，而原核表达系统（如大肠杆菌）则适用于表达结构简单、无需复杂修饰的蛋白质。
2.使用融合标签：
融合特定的标签（如GST、His、SUMO等）可以提高蛋白质的可溶性，并便于后续的纯化步骤。这些标签有助于蛋白质在细胞内的正确折叠和稳定，从而保持其活性。
二、控制培养与诱导条件
1.优化培养条件：
确保培养基成分、温度、pH值和溶氧量等条件适合目标蛋白质的表达。例如，对于某些蛋白质，降低培养温度可以提高其可溶性。
2.合理诱导表达：
使用适当的诱导剂（如IPTG）和诱导时间，避免过度表达导致蛋白质聚集和失活。通过优化诱导条件，可以使蛋白质在细胞内以可溶形式高效表达。
三、温和裂解与纯化
1.选择温和的裂解方法：
使用超声破碎或高压匀浆等方法时，要控制处理条件，避免剧烈处理导致蛋白质变性。可以采用较低的功率和较短的处理时间，以减少对蛋白质的损伤。
2.快速纯化与低温操作：
在纯化过程中，尽量缩短处理时间，减少蛋白质在不利条件下的暴露。同时，在低温条件下（如4℃）进行纯化操作，有助于保持蛋白质的活性。
3.使用合适的纯化策略：
根据蛋白质的性质选择合适的纯化方法，如亲和纯化、离子交换层析、凝胶过滤等。避免使用可能导致蛋白质变性的纯化试剂和条件。
四、添加保护剂与稳定剂
1.添加蛋白酶抑制剂：
在裂解和纯化过程中，加入适量的蛋白酶抑制剂（如PMSF、Leupeptin等），防止蛋白酶对目标蛋白质的降解。
2.使用稳定剂：
添加甘油、蔗糖等稳定剂，可以提高蛋白质的稳定性，防止其在储存和处理过程中失活。
五、储存与运输注意事项
1.低温储存：
将纯化后的蛋白质储存在低温条件下（如-80℃），避免反复冻融导致蛋白质活性降低。
2.快速冷冻与缓慢解冻：
在冷冻蛋白质时，应快速冷冻以减少冰晶形成对蛋白质的损伤；在解冻时，应缓慢解冻以避免蛋白质聚集和失活。
3.避免剧烈震荡：
在储存和运输过程中，避免剧烈震荡和搅拌，以免破坏蛋白质的结构和活性。
