异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate，FITC）是一种重要的荧光染料，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。以下是对异硫氰酸荧光素的详细介绍：
一、基本性质
1.化学式：C21H11NO5S
2.分子量：389.38
3.外观：黄色粉末，有吸湿性
4.溶解性：易溶于水和酒精溶剂
5.荧光特性：在495nm的激发光下，FITC发出明亮的黄绿色荧光，发射波长约为520~530nm。其量子产率高，荧光强度强，且对pH变化不敏感，在较宽的pH范围内（pH4~9）都能保持稳定的荧光性能。
二、合成与标记原理
1.合成：FITC由荧光素与异硫氰酸酯基团反应制得。
2.标记原理：FITC的异硫氰酸基（-N=C=S）能与蛋白质、抗体、多肽等生物分子中的游离氨基（如赖氨酸的ε-氨基、肽链N端的α-氨基）通过共价键结合，形成硫脲键，从而将荧光素标记到生物分子上。
三、应用领域
1.免疫荧光染色：FITC标记的抗体或抗原可用于免疫荧光染色，通过荧光显微镜观察特定抗原或抗体的分布和定位。
2.流式细胞术：FITC标记的细胞或分子可用于流式细胞术，实现细胞或分子的快速、准确分选和分析。
3.荧光显微镜：FITC的明亮荧光使其在荧光显微镜中易于检测，可用于观察细胞结构、细胞间相互作用等。
4.临床诊断：FITC标记的试剂可用于疾病的诊断，如通过检测血液或组织中的特定抗原或抗体来辅助诊断疾病。
四、优点与局限性
1.优点：
高灵敏度：FITC的荧光强度强，能够检测到低浓度的生物分子。
良好的稳定性：FITC对光、热和pH变化相对稳定，适合在多种实验条件下使用。
易于操作：FITC标记方法相对简单，易于掌握。
2.局限性：
光漂白性：长时间暴露于强光下，FITC的荧光会逐渐减弱，即发生光漂白现象。
非特异性结合：在某些情况下，FITC可能与非目标分子发生非特异性结合，导致背景荧光增加。
细胞毒性：高浓度的FITC可能对细胞产生毒性作用，影响细胞的正常生理功能。
五、使用注意事项
1.避光保存：FITC对光敏感，应避光保存，以减少荧光淬灭。
2.优化标记条件：在标记过程中，应优化反应条件（如温度、pH值、反应时间等），以提高标记效率和特异性。
3.控制使用浓度：在使用FITC标记的试剂时，应控制使用浓度，避免对细胞产生毒性作用。
