试剂和器材
1.秋水仙胺：用于使培养的原代细胞停滞在细胞分裂的中期。
2.2-甲-2,4-戊二醇缓冲液：用于重悬和洗涤细胞，其配方为1mol/L 2-甲-2,4-戊二醇、0.5mmol/L CaCl2、0.1mmol/L Pipes-NaOH，pH6.8。
3.梯度溶液：用2-甲-2,4-戊二醇缓冲液配制成不同浓度的Nycodenz溶液，如280g/L、580g/L和600g/L。
4.二甲基二氯硅烷：用于处理离心管，防止细胞粘附。
5.低速离心机与高速离心机：用于不同阶段的离心操作。
6.用于吊桶式转子的15ml Corex管：用于离心操作。
7.23号注射器，带金属套管针：用于裂解细胞。
8.相差显微镜：用于观察细胞裂解过程。
9.双室梯度仪或者Gradient MasterTM：用于制备梯度溶液。
实验方法
1.处理离心管：用二甲基二氯硅烷处理Corex管5分钟，然后60℃烘烤24小时，以防止细胞粘附。
2.使细胞停滞在中期：向培养基中添加6×10^-5g/ml的秋水仙胺，使培养的原代细胞停滞在细胞分裂的中期，并孵育3小时。
3.分离中期细胞：轻轻振摇以选择性分离中期细胞，对分离的原代细胞4℃预冷20分钟，然后300g离心5分钟使之沉淀。
4.重悬和洗涤细胞：用2-甲-2,4-戊二醇缓冲液重悬原代细胞并洗涤，之后再沉淀细胞（步骤同3）。
5.裂解细胞：以相同的缓冲液重悬细胞（细胞浓度应小于2g/L），37℃孵育10分钟，用23号注射针抽吸细胞悬液数次以裂解细胞，通过相差显微镜观察监视裂解过程。
6.沉淀染色体：2000g离心10分钟以沉淀染色体。
7.制备梯度溶液：在处理过的Corex管中用等体积的280g/L和580g/L Nycodenz制备10ml梯度溶液，并将用600g/L Nycodenz悬浮的染色体沉淀放置于管底。
8.离心分离染色体：16300g离心10分钟，染色体带（密度约为1.23g/ml）大约处于梯度的2/3位置。
9.染色体染色：原代细胞中期染色体可以通过显带法染色，以便进一步观察和分析。
