一、产品基本参数与稳定性
1.产品形式:
重组细胞因子和蛋白通常以冻干粉的形式提供,这样更利于产品的运输和稳定。
冻干粉在室温条件下通常非常稳定,但建议在收到产品后保存于-20℃至-80℃,以确保蛋白的活性。
2.稳定性:
重组蛋白在重悬后,于4℃条件下仅能短期保存(约1周)。
如需长期保存,应配制成含有载体蛋白(如0.1% BSA、5% HSA或10% FBS)的稀释液,然后分装冻存于-20℃至-80℃,可保存3-6个月。
避免反复冻融,因为每次冻融均会引起蛋白的部分失活。
二、溶解与储存
1.溶解方法:
在开盖前,建议先对试剂管进行离心,使可能因运输脱落粘附在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。
使用说明书上指定的溶液进行溶解,溶解浓度通常控制在0.1-1.0 mg/ml。
溶解时不可涡旋震荡,剧烈震荡会导致其化学键的断裂,从而造成蛋白失活。
溶解后可根据后续实验需要进一步稀释,稀释溶液需务必含有载体蛋白。
2.储存注意事项:
分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量,分装的体积最好大于20ul,避免吸附带来的蛋白损失。
塑料管壁对多数蛋白均有很好的吸附作用,因此在使用含载体蛋白的溶液进一步稀释后,再分装冻存。
三、实验应用与交叉活性
1.使用推荐浓度:
不同细胞因子(重组蛋白)用于不同的实验,所使用的剂量会有所不同。建议参考相关文献,选择和摸索合适的使用浓度。
2.交叉活性:
大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性,但少数例外。
许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞,但比活性可能低于对应的人类细胞因子。
某些细胞因子(如IL-7)作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。
干扰素、GM-CSF、IL-3和IL-4等细胞因子种属特异,对非同源细胞几乎没有活性。
成纤维细胞生长因子(FGFs)和神经营养素(neurotrophins)高度保守,在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。
四、无动物成分重组蛋白
无动物成分(Animal-Free)的重组蛋白是指在表达人、小鼠或大鼠的重组蛋白的过程中未使用任何动物来源的材料。
这类重组蛋白在生产过程中不会使用到胰蛋白胨等任何含动物成分的培养基或试剂,因此可保证最终的重组蛋白中不含任何动物成分,非常适合于临床前试验和动物研究。
五、其他注意事项
在使用重组细胞因子和蛋白时,应严格遵守实验室安全规范,防止化学试剂对人体的危害。
样品采集和前处理是至关重要的步骤,应确保样品的代表性和均匀性,避免污染。
对于不同批次的重组蛋白产品,其ED50值可能会有所不同。因此,在进行实验时,建议根据自己的实验测定得到最合适的实际ED50值。