一、保存条件
1.温度控制
短期保存（1-4周）：4°C冷藏，适用于频繁使用的抗体。
长期保存（数月至数年）：-20°C或-80°C冷冻，避免反复冻融。
注意：避免抗体在室温下长时间暴露（超过24小时），以防活性丧失。
2.稀释与分装
分装原则：将抗体分装为小体积（如20-100 μL/管），减少冻融次数。
稀释缓冲液：使用含载体蛋白（如0.1% BSA或5%甘油）的缓冲液稀释抗体，增强稳定性。
3.避免污染
无菌操作：使用无菌移液器和容器，避免微生物污染。
密封保存：确保容器密封良好，防止水分蒸发或外部污染物进入。
二、注意事项
1.防止冻融循环
冻融影响：每次冻融会导致抗体活性下降5%-10%，累计3次以上可能显著影响性能。
解决方案：分装后冷冻，使用时仅解冻所需量。
2.避免反复倒置或剧烈震荡
物理稳定性：剧烈震荡可能破坏抗体结构，导致聚集或失活。
操作建议：轻柔混匀抗体，避免产生气泡。
3.光照与氧化防护
避光保存：抗体对光敏感，应使用棕色瓶或铝箔包裹容器。
抗氧化剂：可在缓冲液中添加0.02%叠氮化钠（NaN₃）或0.1%硫柳汞，但需避免用于活细胞实验。
4.pH与盐浓度
缓冲液选择：使用pH 7.2-7.4的PBS或Tris缓冲液，避免极端pH（<6或>8）。
盐浓度：高盐（>150 mM NaCl）可能导致抗体沉淀，建议盐浓度控制在100-150 mM。
三、不同类型抗体的特殊保存要求
1.单克隆抗体
稳定性：通常比多克隆抗体更稳定，但需注意批次间差异。
保存建议：长期保存时添加5%甘油或10%胎牛血清（FBS）。
2.多克隆抗体
稳定性：易受批次间血清成分影响，活性可能随保存时间下降。
保存建议：分装后-80°C保存，避免反复冻融。
3.荧光标记抗体
光敏感性：荧光染料易光解，需严格避光。
保存建议：4°C避光保存，实验前现用现配。
四、常见问题与解决方案
|
问题 |
原因 |
解决方案 |
|
抗体沉淀或浑浊 |
pH或盐浓度不当 |
调整缓冲液pH至7.2-7.4，降低盐浓度 |
|
活性下降 |
反复冻融或污染 |
分装后冷冻，无菌操作 |
|
荧光信号弱 |
抗体浓度过低或光解 |
增加抗体浓度，避光保存 |
五、推荐保存流程
1.收到抗体后：
立即分装为20-100 μL/管，添加含载体蛋白的缓冲液。
短期使用（1-4周）置于4°C，长期保存置于-20°C或-80°C。
2.使用前：
提前将所需量解冻至4°C，避免室温解冻。
轻柔混匀后离心（5000 rpm，1分钟）以收集管壁液体。
3.使用后：
剩余抗体重新冷冻前确保缓冲液成分稳定。
记录冻融次数，超过3次建议丢弃。
六、总结
1.核心原则：低温、避光、无菌、分装、减少冻融。
2.关键操作：使用含载体蛋白的缓冲液、密封保存、轻柔混匀。
3.长期保存建议：-80°C分装冷冻，避免反复冻融，定期检测抗体活性。
