一、样品准备
1.接种与培养：
接种5mL含有酵母携带所需质粒的YDP培养液，将其振荡培养在30℃下16-24小时。
2.收集菌体：
取1-3mL酵母培养菌体（使用少于2×10^7个细胞），在室温下以5000×g离心5分钟，弃去培养液，收集菌体。
二、细胞破壁
1.加入破壁试剂：
向收集的菌体中加入480μL Buffer SE和30μL Lyticase solution（在使用前确保β-mercaptoethanol已添加到Buffer SE中，10µL/毫升），以最快的速度涡旋悬浮1分钟，充分悬浮细胞颗粒有助于提高得率。
2.消化细胞壁：
将混合液置于30℃下消化30分钟左右。
3.离心去除上清：
将消化后的混合液在4000×g室温下离心5分钟，弃去上清液。
三、质粒提取
1.重悬细胞：
加入250μL Buffer YPI重新悬浮混合液颗粒。
2.加入玻璃珠涡旋：
加入50mg玻璃珠，然后以最快速度涡旋5分钟，让样品在玻璃珠作用下沉降稳定下来。转移上清至一个1.5mL离心管中。
3.加入Buffer YPII：
加入250μL Buffer YPII，反复颠倒混匀离心管4-6次以获得干净的溶解产物。将其室温放置5分钟（此步应避免高强度混合，以免使染色体DNA断裂以及降低质粒纯度）。
4.加入Buffer YP III：
加入350μL Buffer YP III，用手大幅度颠倒混匀样品直到形成絮凝白色沉淀。室温下以13000×g离心10分钟。
5.上清液过柱：
将干净的上清液小心转移至DNA Mini Column，取上清时尽量不要打扰颗粒与沉淀。室温下以10000×g离心30秒。倒掉废液，将吸附柱重新插入收集管中。
6.洗涤吸附柱：
向吸附柱中加入500μL Buffer KB，以12000rpm离心30秒，弃去收集管与废液。
将吸附柱放入一个新的收集管中，加入650μL Wash Buffer（确保已加入乙醇），以12000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱重新插入收集管中。此步骤可重复一次以增加洗涤效果。
7.去除残留乙醇：
以13000rpm开盖离心2分钟，以去除残留乙醇。
8.洗脱质粒DNA：
将柱子放入一个新的1.5mL离心管中，向柱中加入50-100μL Elution Buffer（10mM Tris-HCL，pH 8.5），室温放置1分钟，以13000×g离心1分钟进行洗脱。可选步骤：第一次洗脱通常能得到75-80%的DNA，用50-100μL预热（65°C）的Elution Buffer再次洗脱DNA，第2次洗脱可收获另外20%的DNA。
四、注意事项
1.在整个操作过程中，应确保所有试剂和耗材均为无RNA酶污染，以避免RNA酶的降解。
2.在使用Buffer YPII时，应避免高强度混合，以免使染色体DNA断裂以及降低质粒纯度。
3.在加入Wash Buffer前，应确保已加入无水乙醇进行稀释。
4.在洗脱质粒DNA时，可根据需要选择预热Elution Buffer以提高洗脱效率。
