2023/10/31 17:07:00

一、扩增流程

收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。

 

1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养)

 

① 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;

 

② 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)

 

③ 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;

 

④ 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)

 

⑤ 将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;

(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)

 

⑥ 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

 

2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)

四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。

 

3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)

穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。

 

4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。 

 

5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

 

二、转化图片

 

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