在ELISA中除了包被外，一般需进行4-5次加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性，例如规定为加样一滴。此时应该使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可出现气泡。
ELISA中加样须注意如下问题：
1.吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不准确!
2.不要将吸头伸入孔中，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不准确!
正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意：
1.角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确!
2.吸头应当贴着管壁和液面的交界处。
