一、如何储存抗体?
1、一般情况下,浓缩抗体可以在2-8°C条件下储存1-2周;
2、为延长抗体使用期限,建议收到抗体后立即冻存于-20ºC冰箱(50%甘油的凝固点为-24℃);
3、长期储存,建议将抗体分装保存在温度设置更低的冰箱中(分装目的是为了减少反复冻融对抗体活性的损害,同时避免多次从同一管中吸取抗体造成污染)。
具体储存建议以产品说明书及产品标签为准。
二、为什么有些抗体含有BSA、proclin300和叠氮钠?
添加载体蛋白和防腐剂能增加抗体的稳定性和寿命,含有BSA和叠氮化物的抗体可以在2-4°C下储存:
1、牛血清白蛋白(BSA)是蛋白质稳定剂;
2、叠氮化钠和proclin300是防止细菌生长的防腐剂。proclin300具有抗菌活性更广谱、稳定性能更优良、毒性更低等优点,
3、针对不同的抗体,添加不同的防腐剂。
三、为什么某些实验要用到Fc阻断?
由于部分细胞(巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、NK细胞和B细胞等)表面会表达Fc受体,Fc受体与抗体的Fc端结合会影响实验结果。为了避免这种情况,进行免疫组化(IHC)和流式细胞实验(Flow cytometry)前,需加入Fc受体阻断剂进行封闭。
四、为什么某些磷酸化抗体没有检测到条带?
磷酸化抗体没有检测到信号的情况较多,如:
检测位置未发生磷酸化或磷酸化程度低于检测下限。
解决方法:参考相关文献确定磷酸化的位置或相应条件;使用其他位置磷酸化的抗体进行检测。
磷酸化蛋白在提取过程中降解。
解决方法:提取过程中加入适量蛋白酶抑制剂或过钒酸钠等磷酸酶抑制剂。
五、单克隆抗体和多克隆抗体,该如何选取?
单抗针对单一抗原决定簇,多抗则是为抗体混合物,能针对多个抗原决定簇。
六、如何挑选二抗?
二抗的物种来源需要不同于一抗,二抗的反应种属针对一抗的物种来源而定;
例:一抗为兔源性抗体,需要在兔以外的宿主物种(例如山羊、小鼠等)中产生的抗兔二抗。
二抗需与一抗的类别或亚类匹配。
例:一抗是IgM,二抗必须是抗IgM的抗体。