Transwell侵袭实验是一种用于研究细胞侵袭能力的体外实验方法，常用于肿瘤细胞侵袭和转移的研究。以下是Transwell侵袭实验的基本操作步骤：
材料准备
Transwell小室：带有聚碳酸酯膜的小室，膜孔径通常为8 μm。
基质胶（Matrigel）：模拟细胞外基质。
细胞：待检测的细胞。
培养基：适合细胞生长的培养基。
固定液：如4%多聚甲醛。
染色液：如0.1%结晶紫。
PBS：磷酸盐缓冲液。
实验步骤
1. 基质胶包被
稀释Matrigel：将Matrigel用无血清培养基稀释至适当浓度（通常为1:10）。
包被Transwell小室：将稀释后的Matrigel均匀涂布在Transwell小室的上室底部，每孔约50-100 μL。
孵育：将Transwell小室置于37°C、5% CO₂培养箱中孵育1-2小时，使Matrigel凝固。
2. 细胞接种
制备细胞悬液：将待检测的细胞用无血清培养基重悬，调整细胞密度至1×10⁵ cells/mL。
接种细胞：将细胞悬液加入Transwell小室的上室，每孔约100-200 μL。
加入培养基：在下室中加入含10% FBS的培养基，作为化学引诱剂。
孵育：将Transwell小室置于37°C、5% CO₂培养箱中孵育24-48小时。
3. 固定和染色
移除培养基：小心吸去上室和下室中的培养基。
清洗：用PBS轻轻清洗Transwell小室，去除未侵袭的细胞。
固定：将Transwell小室放入4%多聚甲醛中固定30分钟。
染色：将Transwell小室放入0.1%结晶紫染色液中染色20分钟。
清洗：用PBS轻轻清洗Transwell小室，去除多余的染色液。
4. 观察和计数
观察：将Transwell小室膜取下，放在载玻片上，用显微镜观察。
计数：随机选择多个视野，计数穿过膜的细胞数，计算平均侵袭细胞数
注意事项
无菌操作：实验过程中注意无菌操作，避免污染。
细胞密度：细胞密度过高或过低都会影响实验结果，需根据实验需求调整。
孵育时间：孵育时间过长或过短都会影响实验结果，需根据细胞类型和实验需求调整。
通过以上步骤，可以评估细胞的侵袭能力，为肿瘤细胞侵袭和转移的研究提供重要数据。
