会出现这个问题是由于实验室常用的质粒提取试剂盒和PCR产物回收试剂盒的纯化柱经常就少了。试剂盒一般buffer试剂会多给,纯化柱子是绝对不会多给的。
这个问题先说答案,是可以的。
纯化柱一般是由一层硅胶膜起主要作用,硅胶膜可以选择性吸附DNA,RNA。而且这个过程是可逆的。
原理如下:大多数离心柱中吸附DNA的是一层硅胶膜,实际上就是一层玻璃纤维,其表面有大量修饰的硅羟基(Si-OH),硅羟基在溶液中解离后带负电,然后与带正电盐离子、带负电DNA形成电桥,从而吸附住DNA,使得DNA双链变单链,不会被生物大分子溶剂洗脱,但能经水溶性缓冲液水化后,被定量回收,从而实现纯化分离。
硅胶膜在高盐(如4M 盐酸胍)低PH(如PH5.0-6.5)会选择性的吸附DNA,RNA。
硅胶膜在低盐浓度高PH(如PH8.0)会释放DNA,RNA。可以利用硅胶膜的这个特性,达到纯化DNA,RNA的目的。
所以一般在PCR纯化要加binding buffer,其中目的之一就是降低pH。上柱前溶液的PH值应小于7;其次,洗涤液中的乙醇浓度不得低于50%,一般70%--80%之间。最后洗脱,可以用去离子水或者TE(10 mmol/LTris-Cl,1 mmol/L EDTA (pH8.0))。一般长期保存推荐用TE,但是现在很少有人长期保存DNA,不行就重新提取了DNA。