1、取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的培养皿里，PBS洗三遍。
有的时候作的细胞爬片可能比较小，夹取的时候要小心，注意反正面，放在皿里洗比较方便，避免了来回夹取，另外洗的时候加PBS不要太冲，不要细胞冲下来。洗的时候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，没有等5分钟或10分钟。
2、4%冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。
3、0.2%Triton X-100通透10分钟，PBS洗三遍。
4、与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。
5、一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果hao，PBS洗三遍。
6、二抗室温2小时(避光)，或者37度1半小时，PBS洗三遍。
7、用DAPI染核，然后直接照荧光片。
8、蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周，因为甘油不象树脂那样会干，所以不用指甲油封的话会弄的一塌糊涂。
